Qu’est-ce que la résolution en microscopie?
La capacité de distinguer deux points proches comme distincts; r doit être petit pour une bonne résolution.
De quels facteurs dépend la résolution?
De la longueur d’onde (λ) et de l’ouverture numérique (ON).
Formule de la résolution selon Abbe?
r = 1.22 * λ / (2 * ON).
Qu’est-ce que l’ouverture numérique (ON)?
La capacité d’un objectif à capter la lumière; ON = n * sin(alpha).
De quoi dépend l’ON?
De l’indice de réfraction (n) et de l’angle d’entrée de la lumière (alpha).
Pourquoi un n plus grand augmente l’ON?
La lumière se courbe davantage et entre sous des angles plus larges.
Pourquoi un alpha plus grand augmente l’ON?
Il permet de capter un cône de lumière plus large.
Quel est l’effet d’une longueur d’onde plus courte sur la résolution?
Elle diminue r, donc augmente la résolution.
Qu’est-ce que la diffraction?
L’étalement de la lumière lorsqu’elle passe par une petite ouverture; limite la résolution.
Quelle est la limite de résolution du microscope optique?
~0.2 µm.
Pourquoi la diffraction limite la résolution?
Elle empêche la focalisation parfaite en un point, créant des taches de diffraction.
Qu’est-ce qu’un microscope simple?
Un microscope avec une seule lentille convexe.
Qu’est-ce qu’un microscope composé?
Un microscope utilisant plusieurs lentilles: objectif + oculaire.
Rôle de la lentille objective?
Former une image agrandie de l’échantillon.
Rôle de la lentille oculaire?
Agrandir davantage l’image pour l’observateur.
Qu’est-ce qu’un microscope inversé?
Objectifs en bas, lumière en haut; idéal pour cellules vivantes en culture.
Qu’est-ce que la microscopie en champ clair?
Lumière blanche transmise; faible contraste sans coloration.
Limite du champ clair?
La plupart des cellules sont transparentes, nécessitent des colorants.
Qu’est-ce que le contraste de phase?
Transforme les différences d’indice de réfraction en contraste.
Avantage du contraste de phase?
Permet d’observer des cellules vivantes sans coloration.
Limite du contraste de phase?
Présence de halos et signaux hors focus.
Qu’est-ce que la microscopie en champ sombre?
Seule la lumière diffusée par l’échantillon atteint l’objectif; fond noir.
Limite du champ sombre?
Nécessite échantillons qui diffusent bien la lumière.
Qu’est-ce que la microscopie interférentiel/Nomarski?
Contraste interférentiel donnant un effet 3D.
