Celulas Tronco

Question 1

Quais as 3 características que definem as Células Tronco (CT)?

Answer 1

1 Autorrenovação (mesmo após longos períodos de senescência)

2. Clonalidade (CT originam outras CT)
3. Diferenciação em vários tipos celulares (in vivo e in vitro)

Question 2

Quais as categorias das CT com base em sua capacidade de diferenciação? (2)

Answer 2

1. Pluripotentes (Embrionárias - CTE) podem se diferencial em qualquer tipo de celular
2. Multipotentes (Adultas) podem se diferencial em múltiplas, mas não todas, linhagens celulares
3. Pluripotentes Induzidas (CTPi) derivam de celulas adultas geneticamente reprogramadas com potencial embrionário

Question 3

Quais as 3 características das Células Tronco Embionárias (CTEs)?

Answer 3

1. Derivado de um embrião pré ou peri-implantação
2. Capacidade de autorrenovação e proliferação em estado indiferenciado propolngado
3. Capacidade de formar derivados das 3 camadas germinativas após cultura por tempo prolongado (pluripotência)

Question 4

Quais as limitações atuais para o uso clinico das Células Tronco Embrionárias Humanas (hCTE)? (3)

Answer 4

1. Risco de Tumorigenicidade
2. Imunocompatibilidade
3. Isolamento dos tipos celulares para fins terapêuticos

Question 5

V ou F?

Pré-diferenciação das hCTEs antes do uso clínico pode diminuir o risco de desenvolvimento de Teratomas.

Answer 5

V.

Question 6

Quais as fontes de obtenção de hCTEs?

Answer 6

1. Adipócitos (CTAs)

2. Medula Óssea (CTMs)

Question 7

Qual a composição celular do tecido adiposo? (4)

Answer 7

1. Adipócitos
2. Células endoteliais microvasculares
3. Células musculares lisas
4. CTAs

Question 8

Quais as possíveis diferenciações das CTAs? (4)

Answer 8

Diferenciação:

1. Osteogênica
2. Condrogênica
3. Miogênica
4. Adipogênica

Question 9

Como é feita a coleta de hCTAs?

Answer 9

1. Lipoaspiração (Vantagem: não ha necessidade de picar o tecido)
2. Lipectomia

Question 10

V ou F?

CTAs mantém capacidade de diferenciação osteogênica mesmo após lipoaspiracao com ultrassom

Answer 10

Verdadeiro

Question 11

V ou F.
Quando coletado de múltiplos sítios, devem ser guardados separadamente por possuirem capacidades de diferenciação distintas

Answer 11

Verdadeiro.

Question 12

V ou F?
Após a lipoaspiração, o tecido deve ser processado o mais rapidamente possível, sob condições ambientais de cultura celular estéril

Answer 12

Verdadeiro

Question 13

Como é o processo de coleta e processamento das CTAs? (10 etapas)

Answer 13

1º Lavagem do tecido adiposo em Betadine diluído
2º Lavagem 2x em Tampão Fosfato (PBS) na proporção 1:1
3º Digestão 1:1 com solução salina de Hank balanceada contendo 0,075% (p/v) de colagenase tipo II, a 37ºC, em banho-maria com agitação (140 rpm), durante 60 min
4º Agitação e Aeração 15/15 min
5º Inativação com PBP contendo Soro Fetal Bovino (SFB) e 1% de penicilina/estreptomicina na proporção de 1:1
6º Centrifugação a 1000 rpm, por 6 min. Sobrenadante é descartado. Precipitado é a fração vascular estromal
7º Suspensão e Filtração em filtro de 100µm para remoção dos fragmentos teciduais não digeridos
8º Precipitação e Ressuspenção das células em placa de cultura em meio de crescimento
9º Incubação a 37ºC em atmosfera contendo 5% de CO2
10º Contagem de células (10ml de tecido adiposo = 1 milhão de hCTAs)

Question 14

A que se deve a Heterogenicidade das CTAs?

Answer 14

CTAs apresentam subpopulaações com vários marcadores de superfície celular:
Positivas para CD105, STRO-1, CD29, CD144 e CD166
Negativas para CD3, CD4, CD11c, CD14, CD15, CD16, CD19, CD31, CD33, CD38, CD56, CD62p, CD104 e CD144

Question 15

Quais as possíveis diferenciações das CTMs? (4)

Answer 15

1. Adipócitos
2. Osteócito
3. Miócitos
4. Cardiomiócitos

Question 16

Quais às características das Células Tronco Tecido Específicas ou Adultas (4)? E onde são encontradas?

Answer 16

1. Autorrenovação
2. Indiferenciadas
3. Capacidade de diferenciação nos tipos celulares especializados do tecido em que se encontram
4. Transdiferenciacao ou capacidade das CT Linhagem Direcionadas se diferenciarem em tecidos de outra linhagem

Encontradas em quase todos os tecidos após o desenvolvimento embrionário.

Question 17

Quais as subpopulacoes das Células Tronco Tecido Específicas ou Adultas (2) baseadas na sua atividade? Qual a provável função de cada uma delas?

Answer 17

Duas subpopulacoes progenitoras coexistentes:

1. Quiescentes: mantem a longevidade das CT Adultas
2. Ativas: reparo tecidual

Question 18

Quais as vantagens do uso de Arcabouços de biomateriais para distribuição das células tronco? (4)

Answer 18

1. Ambiente controlado
2. Proteção das células implantadas
3. Distribuição do material genético e/ou sinais bioquímicos indutores
4. Suporte estrutural para construção dos novos tecidos
   A. Rígidos (engenharia ossea)
   B. Flexíveis (uso cutâneo)

Ex. Matriz dérmica

Question 19

Quais as vantagens das Células Tronco Pluripotentes Induzidas (iTPs)? (3)

Answer 19

1. Não envolvido em questões éticas de tecidos fetais
2. Autoenxerto (sem imunorreação)
3. Varias opções sítio doador

Question 20

Sobre iTPs, quais são os 4 fatores de Yamanaka para reprogramação?

Answer 20

1. Oct4
2. Sox2
3. Klf4
4. c-Myc

Question 21

Quais as possíveis origens das células ITPs?

Answer 21

1. Fibroblastos
2. Queratinócitos
3. Melanócitos
4. Cordão umbilical
5. Adipócitos (hCTAs)

Question 22

Quais os agentes da integração genômica dos transgenes nas células hospedeiras? (2)

Answer 22

1. Lentivírus

2. Retrovírus

Question 23

Quais as vantagens do uso das HCTAs para produção de iTPs? (4)

Answer 23

1. Procedimento de obtenção (lipoaspiração) simples, rápido e seguro.
2. Fácil obter grande quantidade de hCTAs
3. Rápida reprogramação podendo ser realizada imediatamente.
4. Derivação livre de alimentador (fibroblastos murinhos que poderiam contaminar as células humanas e desencadear resposta imunológica)

Question 24

Quais as limitações do uso das iTPs? (3)

Answer 24

1. Camada alimentadora de fibroblastos murinos
   Solução: Camada livre de alimentador ou Matrigel sem componetes animais
2. Vírus utilizado na reprogramação pode se incorporar ao genoma humano
   Solução: Plasmídio minicírculo
3. Risco de teratoma
   Solução: pré-diferenciação antes de colocá-la in vivo.