DNA-Sequenzierung

Question 1

Was ist die Sequenzierung und welche Methode gibt es?

Answer 1

Sequenzierung = Bestimmung der Basenfolgen der DNA

Kettenabbruchmethode nach Sanger

Question 2

Wie läuft die Kettenabbruchmethode nach Sanger ab?

Answer 2

1. Denaturierung
2. Synthese der Komplementärstränge
3. Denaturierung
4. Gel-Elektrophorese
5. Ablesen

Question 3

Wie läuft die Synthese der Komplementärstränge bei der Kettenabbruchmethode ab?

Answer 3

1. beginnt an hinzugefügtem, radioaktiv markiertem Primer
2. Synthese durch DNA-Polymerase katalysiert
3. Synthese in vier Reaktionsgefäßen
4. In jedem Gefäß befinden sich die vier Desoxynucleosid-Triphosphate (dATP,…)
5. in jedem Gefäß ein Sorte der vier Abbruchnucleotide (ddATP,…), ihnen fehlt am dritten Kohlenstoffstom des Zuckers ein Sauerstoffatom: Didesoxynucleosid-Triphosphat

Question 4

Was muss bei dem Ablesen der Basensequenz nach der Gel-Elektrophorese beachtet werden?

Answer 4

Abgelesene Basensequenz ist zu der analysierendenkomplementär

Beginnt mit der DNA-Bande, die am weitesten gewandert ist