Na eletroforese quais as diferenças dos íons cátion e ânion e dos eletrodos cátodo e ânodo?
Cátodo (-): eletrodo negativo
Ânodo (+): eletrodopositivo positivo
Cátion (+): partículas carregadas positivamente
Ânion (-): partículas carregadas negativamente
O que seria uma molécula anfotérica? E o que é o ponto isolétrica de uma molécula anfotérica?
Uma mólecula com ambas as cargas, positiva e negativa.
O ponto isoelétrico é o pH no qual a molécula não tem carga elétrica e não migra dentro do campo elétrico
Em quais condições uma molécula anfotérica migra para o cátodo ou para o ânodo?
Em um a solução mais ácida (pH baixo) - mólecula migra para o cátodo (moléc. posit. - polo negativo)
Solução alcalina (pH alto) - molécula migra para o ânodo (moléc. neg. - polo positivo)
Quais os fatores que irão afetar a taxa de migração em uma eletroforese?
- a carga elétrica líquida da molécula
- o tamanho e a forma da molécula
- a intensidade do campo elétrico
- as propriedades do meio de suporte
- a temperatura da operação
Quais os 2 principais meios de suporte utilizados na eletroforese?
gel de agarose e poliacrilamida
Quais as vantagens da poliacrilamida em relação ao gel de agarose?
A poliacrilamida tem uma estabilidade e durabilidade maiores que o gel de agarose porém é mais cara.
Quais os reagentes de uma eletroforese?
- Solução tampão
- Meio de suporte
Quais as 4 etapas da eletroforese (manual/automatizada)?
- Separação
- Coloração
- Detecção
- Quantificação
Quais as 2 metodologias de separação de moléculas que podem ser utilizadas na eletroforese?
- Capilaridade (eletroferograma - gráfico)
- Câmara isoelétrica (gel - bandas)
Quais os 4 corantes mais utilizados para proteínas séricas?
- Amido Black B
- Azul Brilhante de Coomassie R-250
- Azul Brilhante de Coomassie G-250
- Ponceau S
Qual o corante utilizado para isoenzimas?
Azul de nitrotetrazólio
Qual o corante utilizado para lipoproteínas?
Preto Sudan B
Qual o corante utilizado para proteínas do LCR?
Nitrato de prata
Qual o corante fluorescente utilizado para fragmentos de DNA?
brometo de etídeo
A técnica de western blot é utilizada em quais situações?
- identificar uma sequência específica de DNA
- determinar a presença, posição e o número de cópias de um gene em um genoma
- proceder a tipagem do DNA
Dentro da técnica de western blot, qual a diferença entre northern blooting e southern blooting?
- northern blooting: DNA, RNA, genes
- southern blooting: proteínas
