Na técnica de Gomori, que reação se usa?
Sulfato de chumbo reage com a fosfátase ácida dos lisossomas.
Quais os tipos de lisossomas?
• Lisossoma primário (LsP) - aspeto muito homogéneo
e regular no seu conteúdo
• Lisossoma secundário (LsS) - textura heterogénea
Quando os lisossomas exerciam a sua atividade,
deixavam de ter o aspeto homogéneo e adquiriam
aspeto heterogéneo, tomando o nome de LsS.
Ainda havia uma terceira classe chamada de corpos
residuais:
- estruturas que pareciam lisossomas secundários
- não possuíam enzimas hidrolíticas
Possivelmente resultam de lisossomas secundários que deixaram de realizar atividade hidrolítica.
Como se formam os lisossomas
VER IMAGEM DA SEBENTA PAGINA 34
Endossomas precoces transportando proteínas da membrana plasmática endocitadas + vesículas
transportando proteínas da membrana lisossomal da trans-Golgi network fundem-se com o endossoma
tardio, transferindo as suas proteínas membranares para a membrana do endossoma
Proteínas para serem degradadas, como as da membrana são incorporadas em vesículas que invaginam
da membrana endossomal, formando um corpo multivesicular com várias vesículas internas
Fusão de um corpo multivesicular diretamente com um lisossoma liberta as vesículas internas para o lúmen
lisossomal, onde podem ser degradadas
Quantos tipos de enzimas hidrolíticas é que os lisossomas contêm? De que tipo são? Para que serve a acidez do lisossoma? Como é mantido este ph? Qual a característica das proteínas da membrana lisossomas que as protege das protéases do lumen?
• Contém cerca de 40 tipos de enzimas hidrolíticas
• São todas hidrolases ácidas - pH ótimo de atividade é ácido
• O lisossoma fornece essa acidez (4,5-5,0) → conteúdos do citosol ficam protegidos, pois:
- a membrana encerra as hidrólases
- mesmo que haja uma fuga, o pH citosólico de 7,2 não permite grande atividade
• O pH baixo é mantido de uma forma ativa (bomba de protões) - adquirido por ação contínua do transporte de protões do hialoplasma para o lúmen lisossomal
• Muitas das proteínas da membrana lisossomal são
altamente glicosiladas - confere proteção das proteases no lúmen
Qual o marcador específico das enzimas lisossomais provenientes da TGN em células animais? Quando é que este marcador é adicionado?
Manose-6-fosfato. Este marcador é adicionado exclusivamente aos N-oligossacarídeos destas enzimas ao atravessaram a cis-Golgi network.
Passos da adição do marcador às enzimas lisossomais.
- Interação da hidrólase lisossomal que é uma glicoproteína com um resíduo de manose no carbono 6
com a GlcNAc fosfotransférase que catalisa a transferência do fosfato - Existe uma molécula doadora (UDP-GlcNAc) que é a N-acetilglicosamina ligada à uridina di-fosfato
(UDP-N-acetilglicosamina) que se liga ao sítio catalítico da fosfotransférase - Ocorre a transferência do fosfato para a hidrólase, ficando esta marcada com uma manose 6-fosfato
- Concentração destas enzimas marcadas em zonas do trans-Golgi e ligação a recetores M6P (regulados
pela concentração de M6P) gera a formação de uma vesícula que evagina - Destaque de uma vesícula de transporte em direção ao lisossoma (neste caso, via um endossoma
precoce)
• Com o pH já acídico do endossoma, as hidrólases dissociam-se dos seus recetores M6P, voltando estes
para o TGN em retrómeros e permitindo a sua reciclagem
• Dentro dos endossomas, o fosfato é removido da M6P ligada às hidrólases, garantido que as enzimas
não regressem ao TGN com o seu recetor
Quais as 4 vias diferentes de diferentes fontes
que fornecem substâncias para digestão nos
lisossomas?
• Endocitose - captação de macromoléculas
provenientes do fluido extracelular
• Fagocitose - “engolir” grandes partículas/
microorganismos para formar fagossomas
• Macropinocitose - captação não específica
de fluidos, membrana e partículas ligadas à
membrana plasmática
• Autofagia/autofagocitose - origina no
citoplasma da célula e é usada para digerir
citosol e reciclar organelos que não
funcionem corretamente
Passos da autofagocitose
- Cínases que transmitem informação sobre
o estado metabólico da célula são ativadas
e sinalizam a maquinaria autofágica - Nucleação e extensão de uma membrana
delimitante: vesículas membranares com
presença de Atg9 - Encerramento dessa membrana à volta do
alvo para formar um autofagossoma com
dupla membrana - Fusão do autofagossoma com os lisossomas, catalisada
pelas SNAREs - Digestão da membrana interna e do conteúdo lumenal
O que são as Atg9
família de proteínas transmembranares que direcionam
membrana de organelos dadores ao autofagossoma em expansão.
Passos da macropinocitose
- Os ligandos ativam uma via de sinalização complexa → alterações na dinâmica da actina
- Formação de saliências chamadas ruffles
- Quando as ruffles voltam a cair sobre a célula, formam grandes vesículas endocíticas cheias de fluido
chamadas macropinossomas - Os macropinossomas depois acidificam e fundem com endossomas tardios ou endolisossomas
De onde deriva a lipofuscina?
lisossomas secundários que entretanto perderam, na totalidade, o seu conteúdo em enzimas hidrolíticas. Há quem defenda que contenham lípidos e proteínas fortemente oxidados para os quais não há enzimas capazes de os destruir, levando à sua acumulação.
Quais os 2 tipos de leucócitos especializados na fagocitose
Neutrófilos e macrófagos.
