ĐL hoạt độ amylase trong máu bằng PP đo quang động học
- a-Amylase xúc tác sự thủy phân p-nitrophenyl a-d-maltoheptaosid tạo thành chất trùng hợp oligosaccarid giữa glucose và p-nitrophenol có chuỗi ngắn hơn.
- Những chất này tiếp tục bị thủy giải bởi glucoamylase và a-glucosidase để giải phóng p-nitrophenol
- Sự gia tăng tốc độ hấp thu ở bước sóng 405nm tỷ lệ với hoạt độ a-amylase
Hoạt độ enzym biểu thị bằng đơn vị
enzym U (Unit)
PP xác định hoạt độ enzym thường sử dụng
Đo quang động học
Một đơn vị enzym là
Là một lượng enzym cần thiết để xúc tác việc biến đổi một micromol cơ chất trong 1 phút ở 25 độ C trong những đk tối ưu của enzym
ĐL hoạt độ amylase trong nước tiểu bằng PP Wohlgemuth
Cho nước tiểu trong đó có amylase tác dụng với hồ tinh bột trong những điều kiện pH và nhiệt độ thích hợp.
Lượng TB bị thủy phân -> hoạt độ enzym
Các yếu tố ảnh hưởng đến hoạt độ enzym
- Nồng độ cơ chất
- Nồng độ enzym
- Nhiệt độ
- pH
- Chất ức chế, chất hoạt hóa
Nguyên tắc ảnh hưởng của nhiệt độ
- Vận tốc phản ứng của enzym tăng khoảng 2 lần khi nhiệt độ tăng 10 độ C
- Ở nhiệt độ thấp (VD 0 độ C), v xúc tác enzym rất thấp -> bảo quản enzym
- Từ 45-50 độ C, enzym bđ biến tính -> v xúc tác sẽ chậm dần.
- Đến 60-80 độ C, enzym mất khả năng hoạt động
- Ở 100 độ C enzym hoàn toàn bị phân hủy
Nhiệt độ thích nghi: nhiệt độ enzym có v cao nhất, có khả năng tác dụng lâu dài, thường 40-45 độ C
Nếu thí nghiệm chỉ xảy ra vài giây đến 1 phút thì nhiệt độ thích nghi có thể nằm trong gh cao hơn (50-60 độ C)
Nguyên tắc tính đặc hiệu của enzym
- Mỗi enzym chỉ tác dụng lên một cơ chất nhất định
+ Maltase của nước bọt chỉ thủy phân maltose
+ Amylase của nước bọt chỉ thủy phân polysaccarid
Ảnh hưởng của chất hoạt hóa và chất ức chế lên hoạt động enzym
- Chất hoạt hóa: Chất có khả năng tăng cường hoạt động của enzym Mg2+, Mn2+, Zn2+,..
- Chất ức chế: Chất kìm hãm phản ứng xúc tác enzym Cu2+, Hg2+, Pb2+, Ag2+,…
Ảnh hưởng của pH lên hoạt động của enzym
- Hoạt tính enzym thể hiện ở 1 khoảng pH tương đối hẹp gọi là pH tối ưu
(pepsin pH 1,2-2,5; trypsin pH 8,0-9,0; amylase pH 6,9-7,0, lipase pH 6,0) - Mức độ ion hóa của enzym phụ thuộc vào pH môi trường
Amylase tăng nhiều trong
viêm tụy cấp, quái thai
