1
Q
o que é a fixacao ?
A
É a primeira etapa histotécnica após colheita do material biológico.
Visa a preservação dos tecidos.
Os tecidos estão inseridos em sistemas vivos com homeostase, estando sempre a receber quer a nível nutricional, hormonal, etc., estímulos. Quando um tecido é removido vivo vai entrar em necrose (sem estímulos o tecido morre, quando morre dá-se a morte celular e ocorrem reações).
A nível da anatomia patológica o que se deseja é que os tecidos estejam
preservados para que o diagnostico seja feito num tecido que mimetize o tecido em estado vivo, se não estiver preservado podem-se dar alterações celulares tendo como consequência não se poder fazer um diagnostico com base neste tecido. Logo, esta etapa da fixação é muito fundamental.
2
Q
quais sao as consequencias de uma ma fixacao?
A
Uma má fixação compromete todo o trabalho posterior, uma vez que é impossível reconstituir um tecido mal preservado. Um tecido que não seja num determinado tempo fixado para depois ser preservado, encontra-se num processo irreversível, pois sem fixação e preservação dão-se reações irreversíveis e depois disto não há nada que se possa fazer.
3
Q
o que fazer ao orgao depois de removido ?
A
- Depois de removido, um órgão ou tecido começa imediatamente a sofrer alterações (o tempo que ocorre desde a remoção até àcolocação do tecido em fixador ou outro método de fixação deve ser o mais curto possível), pois todas as vigilâncias que existiam para evitar a autólise das células desaparecerem e as enzimas
começam a digerir as membranas proteicas. - Para o seu estudo devem ser recriadas as condições que existiam
no seu ambiente de origem, tendo em atenção que não podem ser idênticas, porque não existem estímulos hormonais. - A fixação deve promover a máxima semelhança entre o aspeto do tecido visto ao microscópio e o seu aspeto no estado in vivo.
4
Q
o que ocorre na autolise tecidular ?
A
- Ocorre devido a algumas enzimas presentes continuarem os seus processos metabólicos – autodigestão enzimática.
- Instabilidade da membrana lisossómica causada por fatores físicos e/ou químicos promove a sua rutura.
- Libertação enzimática → digestão da parte orgânica da célula e, consequentemente, a sua destruição.
- O grau menor ou maior de autólise depende da localização, natureza e temperatura ambiente que o tecido se encontra (o aumento da temperatura acelera as reações).
5
Q
o que acontece na putrefacao tecidular ?
A
Putrefação é a destruição dos tecidos por ação microbiana, por efeito de toxinas e enzimas bacterianas.
Após a extirpação as defesas do organismo contra os microrganismos, incluindo os que constituem a flora normal.
Os órgãos mais sujeitos são aqueles que possuem uma flora normal abundante, como o intestino.
Elevada influência da temperatura.
6
Q
quais os orgaos que entram em autolise com mais facilidade ?
A
pâncreas, fígado, cérebro (órgãos com conteúdo enzimático elevado, logo entram em autólise com maior facilidade quando o tecido é removido do seu sistema dinâmico).
7
Q
quais os orgaos que entram em putrefacao com maior facilidade ?
A
estômago, vesicula biliar (estes 2 órgãos, por exemplo, têm presentes muitas enzimas e, por isso, entram em autólise mais rapidamente), intestinos (tem microbiota normal, onde estão presentes bactérias que equivalem a 2 Kg do nosso peso corporal, devido a estas bactérias entram em putrefação mais rapidamente).
8
Q
o que acontece na fixacao ?
A
- As macromoléculas estão presentes nos tecidos no estado coloidal (suspensão).
- A fixação induz a novas ligações entre as macromoléculas e provoca a sua solidificação.
- As soluções são transformadas em géis estabilizados (ex.: quistos – estes não são sempre líquidos)
- O endurecimento dos tecidos é desejável desde que não seja muito acentuado, porque
permite a manipulação das peças sem as danificar. O corre mudança de cor.
9
Q
o que acontece aos indices de refracao apos a fixacao ?
A
Os vários elementos tecidulares têm um índice de refração homogéneo, logo é
impossível diferenciá-los em cortes não corados.
A fixação modifica o índice de refração dos tecidos de forma não uniforme, permitindo
distinguir certos detalhes celulares mesmo antes da coloração.
10
Q
o que acontece ao volume dos tecidos apos a fixacao ?
A
A fixação modifica de forma mais ou menos pronunciada o volume dos tecidos.
Esta modificação é maior ou menor consoante a quantidade de água que
constitui o tecido e a diferença da pressão osmótica entre o fixador e os tecidos.
Qualquer que seja o fixador, o tecido sofre nas fases seguintes uma retração, que anula os efeitos de inchaço derivados da fixação.
Nota: A água tem de sair para que possa entrar o fixador.
11
Q
qual é a relacao entre o fixador e a solubilizacao da estrutura ?
A
Utilizar fixadores que não conduzam à solubilização de determinada estrutura ou
substância que se pretende estudar (queremos que as substâncias sejam insolúveis no nosso fixador).
Exemplo: preservação de glicogénio no endométrio (fixador alcoólico preserva melhor glicogénio).
A retenção de glicogénio e alguma glicose deve-se à ação de uma rede proteica
formada durante o processo.
As formas menos polarizadas de glicogénio serão dificilmente fixadas por
fixadores de rotina.
As formas mais polarizadas são retidas por uma variedade de fixadores.
Exemplo: Carnoy (fixador de base alcoólica), a formalina também preserva glicogénio,
mas não em todas as formas
12
Q
quais sao os efeitos positivos e negtivos da fixacao ?
A
Positivo: separa os ácidos nucleicos das histonas libertando os grupos reativos (fosfatos) facilitando a sua deteção (no caso da hematoxilina ela ligava-se ao núcleo das células devido à presença do ácido fosfórico).
Negativo: se a fixação for longa extrai os ácidos nucleicos e anula o seu estudo. Há basofilia nuclear.
13
Q
de forma geral como se podem dividir os metodos da fixacao ?
A
- Métodos Físicos - frio e calor
- Métodos Químicos
14
Q
como é o metodod fisico - frio ?
A
- Baseia-se essencialmente na congelação do tecido como forma de preservação (e não
de fixação). - Utilizado para o estudo morfológico e/ou funcional – conserva o conteúdo enzimático(as enzimas num agente químico, neste caso na fixação, perdem a sua estrutura quaternária e terciárias e ficam imoveis, se queremos estudar a sua atividade não podemos fazer uma fixação com um químico, portanto para fazer estudos
histoenzimáticosnecessitamos de recorrer ao frio e cortes congelação) e antigénico do
tecido (uso de imunofluorescência para os estudar através de anticorpos específicos para aquele antigénio, o formaldeído que vai fixar a amostra por adição de pontes de metileno, vai mascarar o antigénio). - A congelação deve ser instantânea para ser boa.
- A congelação lenta e progressiva provoca a formação de cristais nos tecidos.
- Utiliza-se a congelação, também, na conservação de cadáveres em câmaras frigoríficas.
15
Q
quais sao os tipos de metodos no frio ?
A
- Congelação instantânea por imersão em isopentano.
- Criodissecação ou Liofilização.
- Criossubstituição.
16
Q
o que é a criodissecação ou liofilização ?
A
- Arrefecimento instantâneo em nitrogénio líquido.
- A água é removida numa câmara de vácuo a - 40°C (sublimação).
- Conserva na íntegra a estrutura antigénica.
- O tecido pode ser fixado em FA (formaldeído).
- Técnica restrita em laboratórios de investigação.
17
Q
o que é a criossubstituição ?
A
- Envolve a rápida congelação até aos –160°C em isopentano.
- Os tecidos são imersos em acetona (altamente volátil, portanto evapora rapidamente
dos tecidos) e álcool, por exemplo, que removem a água lentamente através da
dissolução dos cristais gelados que se formam com a congelação do material. - O aumento gradual de temperatura até aos 4°C termina eficazmente a fixação.
- As peças são cortadas no crióstato ou criomoto e são mantidas a essa temperatura.
- É fácil, conveniente, seguro, e fácil de implementar em laboratório.
18
Q
como é o metodo fisico - calor ?
A
- Acelera as reações.
- Altera profundamente os tecidos → evitar.
- Utilizado em casos de diagnóstico imediato.
- Eventual fixação de esfregaços na chama → Gram (técnica muito antiga, mas ainda utilizada, que permite distinguir gram positivos de negativos).
Passamos a lamina com o esfregaço na chama do bico de bunsen para acelerar
a reação, que vai ser uma reação para abrir os poros da parede celular das bactérias
para que os corantes penetrem com maior eficácia.
É uma eventual fixação, até não devendo ser utilizada, porque se deixarmos um
bocado mais no período de permanência não é necessário calor para o corante penetrar
a célula, para além disso estar a aquecer estes componentes que tem fenol presente não é nada saudável, portanto este método apesar de ser bom para acelerar reações, não é muito recomendado. - O seu uso maioritário prende-se com a necessidade de acelerar certas reações celulares ou as reações entre o fixador e o tecido.
- Utilização de microondas
19
Q
para que é usado o microondas ?
A
- Biópsias de pequeno tamanho.
- Solução isotónica de NaCl.
- Fixação pela ação das MW durante 3 a 5’.
- Preservação de antigénios.
- Podem ser utilizadas soluções fixadoras, como a formalina → calor aumenta a
volatilidade.
20
Q
quais sao os tipos de fixacao ?
A
Vapores
Perfusão
Imersão (mais utilizado)
21
Q
como é a fixacao por vapor ?
A
- Aquecimento do fixador.
- Coloca-se o tecido a fixar por cima do fixador.
- A libertação de vapores vai provocar a fixação da peça.
- Aplicações:
Tecidos preservados por criodissecação ou liofilização.
ICQ (imunocitoquímica).
Estudos de fluorescência para anticorpos.
Demonstração de enzimas hidrolíticas.
Estudos ultraestruturais (utiliza-se estes fixadores em microscopia eletrónica):
▪ Formaldeído (aldeído mais simples cor transparente)
▪ Glutaldeído (dialdeído, molécula mais estável que o 1º)
▪ Tetróxido de ósmio (cor preta)
22
Q
como é a fixacao por perfusao ?
A
- Técnica utilizada em animais de experimentação vivos.
- Consiste na “injeção” de líquido fixador no sistema
circulatório com o animal anestesiado – permite um estudo mais in vivo possível. - Em AP utiliza-se uma técnica similar à perfusão, ex.: na
árvore brônquica. - Pseudo-perfusão – técnica ex vivo (células já saíram do seu sistema dinâmico); injeção de fixador na árvore brônquica, fixação de fora para dentro – se não fixarmos o suficiente ao cortar no meio o corte ainda está em sangue.
23
Q
como é a fixacao por imersao ?
A
Dos métodos mais utilizados. Consiste em emergir
completamente o tecido no líquido fixador (tecido tem de estar todo em contacto com o líquido fixador senão o fixador não consegue atuar).
Existem fatores que influenciam a fixação por imersão:
* Intervalo entre a colheita do material e a fixação – o intervalo deve ser o mais curto
possível para inibir fatores tal como a putrefação e autólise, para ficar o mais perto
possível do seu estado vivo no nosso caso usamos o tecido ex vivo.
* Rapidez de penetração do fixador.
* Volume do líquido fixador.
* Espessura do material biológico.
* Consistência dos tecidos.
* Tempo da fixação.
* Concentração do fixador.
* Temperatura.
* pH.
* Lavagens pós-fixação.
* Pressão Osmótica.
* Tipo de Fixador.
24
Q
como preservar o material biologico entre a colheita e a fixacao ?
A
- O mais rápido possível.
- Recipientes adequados e com líquido fixador.
- Câmara frigorífica na preservação de cadáveres.
- Para fixar uma peça, normalmente, leva-se 24h, logo no laboratório de anatomia patológica acondiciona-se a peça de forma a potenciar a fixação.
25
quais sao os cuidados especificos de fixacao a ter com pulmao, mama, intestino e estomago?
Pulmão: Quando se coloca o pulmão num líquido fixador ele flutua por estar cheio de ar. Faz-se, portanto uma pseudoperfusão onde injetamos fixador através da árvore brônquica para começar a fixar de dentro para fora, para além disso também se coloca gazes embebidas em formalina na superfície do pulmão para fazer peso com finalidade deste ficar totalmente submerso.
Mama: A mama pela sua constituição em adipócitos é também um órgão com
tendência a flutuar, além disso a mama é um tecido difícil de trabalhar, porque dificulta a penetração pelos reagentes (ex. formalina, etanol, parafina) e como
consequência acaba por haver um processamento mais alongado para a fixar.
Para resolver a fixação neste caso, fatia-se a mama em cortes paralelos e abrimos para que o fixador para além de penetrar pela superfície externa também penetre através de novas superfícies de corte feitas (isto acelera a
fixação). A mama originalmente não tem corte nenhum, mas a tendência
quando se fazem estes cortes na mama é que o tecido se volte a unir, para se evitar isto coloca-se gazes entre os cortes seriados da mama de forma que eles não fechem e colocam-se gazes na superfície para que fique submersa.
Órgãos tubulares:
Intestino: quando este órgão chega a AP normalmente é cortado e depois ou
coloca-se gazes no meio do lúmen de forma que este não enrole entre si e dificulte a fixação ou então estica-se o intestino numa placa de forma que seja fixado.
Estômago: processo igual ao do intestino.
26
porque é que fazemos cortes nos orgaos ?
Temos um fragmento colocado num líquido fixador e o fixador vai atuar da superfície
externa para a interna. Se for um fixador com um fraco poder de fixação vai demorar muito tempo a fixar o centro do tecido. Nós não queremos isto, pois acaba por ser uma zona não representativa para dar o diagnóstico, o que fazemos então são cortes seriados transversais para
que o fixador possa penetrar no interior do tecido também. O objetivo é mesmo aumentar a superfície de contato.
27
quais sao os 3 tipos de fontes de material biologico ?
Necropsias ou Autopsias
Cirurgia: quando se esgotou vários métodos de diagnóstico menos invasivos, possivelmente já se fez uma biopsia para perceber que tipo de patologia era aquela, e,
por isso, agenda-se uma cirurgia para remover uma lesão, sendo feita mais numa
perspetiva terapêutica do que diagnóstica.
Biopsia: serve para se confirmar ou não uma patologia que se suspeita.
Exemplo: Pessoa com ardor no estomago há muito tempo, vai ao medico e há a suspeita
que pode ser uma gastrite aliada à presença da Helicobacter pylori, o que se faz é uma endoscopia para visualizar o estomago e remove-se um pequeno fragmento.
28
quais sao os fatores que influenciam a fixacao ?
Rapidez de Penetração do Fixador
Volume do Líquido Fixador
Espessura do Material Biológico
Consistência dos Tecidos
Duração da Fixação
Concentração do Fixador
Temperatura
pH
Lavagem Pós-fixação
Pressão Osmótica
29
como é que a rapidez de penetracao do fixador influencia a fixacao ?
* Depende de que tipo de agente químico estamos a falar.
* A velocidade de penetração é uma propriedade intrínseca de cada fixador.
* O fixador que atua mais rapidamente é o que nos permite ver as coisas boas e más.
* Misturas fixadoras.
* E.g. de fixadores por ordem decrescente de rapidez:
Ácido acético
Ácido tricloroacético
Formalina a 10% - o mais utilizado, excelente fixador de lípidos.
Etanol a 95%
Cloreto de mercúrio
Ác. Pícrico em solução aquosa saturada
Bicromato de potássio
Tetróxido de ósmio (usado em ME juntamente com o glutaraldeido, é uma solução combinada, mas não é uma mistura, pois coloca-se primeiro um e depois o outro)
30
como é que o volume do liquido fixador influencia a fixacao ?
A quantidade de líquido fixador influencia diretamente a rapidez de reação da fixação.
Para obter resultados ótimos o volume do fixador deve ser entre 20 a 40X superior ao
da peça (literatura variável). Como na literatura estas informações variam o que se faz é colocar o fixador até estar tudo completamente tapado.
As peças normalmente vão a fixar durante 24h, se nestas 24h não estiver fixado e
tivermos de renovar o líquido fixador renovamos. Isto porque, por exemplo, se
quisermos colocar a fixação com formalina terá que sair água e, portanto, para o fixador estar fresco e concentrado para atuar teremos que o renovar, senão o que vai ficar ali já que saiu água é mais água e não se fixa desta forma.
Os frascos de armazenamento devem ser de boca larga para permitir o manuseamento
das peças.
Algumas peças devido à sua constituição tendem a adquirir a forma do frasco onde estão inseridas.
31
como é que a espessura do material biologico influencia a fixacao?
Quanto menor a espessura do material biológico, mais rápida e eficiente será a fixação.
Espessura (altura) máxima recomendada – 5 mm, porque queremos que a trocas que
ocorrem sejam ótimas e também porque o processamento histológico está otimizado para estas espessuras. Se, por exemplo, tivermos um fragmento superior a 5mm não
poderemos fechar as cassetes (isto no caso do tratamento em que os fragmentos vão
para cassetes).
32
como é que a consistencia dos tecidos influencia a fixacao ?
Quanto mais denso um tecido mais difícil se torna a penetração do fixador.
33
como é que a duracao de fixacao influencia a fixacao ?
A duração da fixação depende da maioria das outras variáveis, nomeadamente:
* Espessura das peças – a fixação é mais rápida quanto menor a espessura;
* Volume das peças;
* Volume do fixador – quanto maior o volume do fixador mais rápida a fixação (colocamos até a peça ficar totalmente submersa);
* Temperatura – maior temperatura leva a uma rápida reação;
* Tipo de fixador – está relacionado com as características de cada um, um fixador que atue de forma rápida faz com a duração de fixação seja menor, já um que atue de forma lenta faz com que a duração de fixação seja maior.
34
como é que a concentracao do fixador influencia a fixacao ?
Quanto maior a concentração de um líquido fixador maior a rapidez de fixação.
No entanto, deve-se ter cuidado, uma vez que concentrações elevadas podem ser prejudiciais para a estrutura do material biológico.
35
como é que a temperatura influencia a fixacao ?
A fixação trata-se de uma reação química e como tal é influenciada pela temperatura.
O aumento da temperatura acelera a fixação.
O frio retarda a fixação, pelo método químico.
A temperatura ambiente deve ser sempre tida em conta.
36
como é que o ph influencia a fixacao ?
Os valores de pH extremos podem ter efeitos nocivos, bem como as variações.
Utilizam-se fixadores com um pH variável entre 6 e 8.
Para a preservação da ultraestrutura é importante que o pH do fixador seja entre os 7.2 e 7.4 (ou seja usam-se soluções tampão).
37
como é que a lavaem pos-fixacao influencia a fixacao ?
Alguns fixadores formam pigmentos artefatuais nos tecidos, sendo necessárias lavagens pós-fixação.
* Pigmento Formólico: não é suposto acontecer, só acontece porque as soluções de formalina (a formalina é incolor) antigas formam ácido fórmico e fazem com que a
solução acidifique e aparece o tal pigmento que é castanho.
Removido com Ácido pícrico alcoólico e com Carbonato de lítio.
* Pigmento de Ácido pícrico: tem uma cor amarela fluorescente. Removido com Carbonato de lítio.
* Pigmento de Mercúrio: Removido com Iodina de Lugol e Tiossulfato de sódio.
Evita-se utilizar um fixador com mercúrio, porque a nível ambiental é toxico.
38
como é que a pressao osmotica influencia a fixacao ?
A osmolaridade das misturas fixadoras é importante.
Nº de partículas que se encontram em solução.
Qualquer fixador provoca efeitos de retração nos tecidos.
Soluções hipertónicas acentuam a retração.
Soluções hipotónicas podem provocar o rebentamento das células.
Aspeto com elevada relevância na ME (estuda-se ultraestruturas na ME).
39
como podemos classificar os fixadores ?
O modo de atuação.
Mecanismo de ação.
A natureza das estruturas a fixar.
40
segundo o modo de atuacao como sao classificados os fixadores ?
Aditivos: está a adicionar algo, ex.: adicionar pontes de metileno entre os aminoácidos
Não aditivos: não fixam por adição
Coagulantes: coagulam proteínas
Não coagulantes
( ver esquemas da pg 18 )
41
quais sao os mecanismos de acao ?
Álcoois – mecanismo dos fixadores por coagulação.
Aldeídos – mecanismo dos fixadores aditivos.
Cross-linking.
Permitem preservação antigénica sendo necessário depois fazer a recuperação
de antigénio (isto em imunocitoquimica, se o fizermos em imunofluorescência
utilizamos o frio, fazemos cortes de congelação e não necessitamos de recuperação do antigénio).
Agentes Oxidantes
Desnaturação proteica extensa.
Formação de ligações cruzadas.
Tetróxido de ósmio e Dicromato de potássio.
Mercúrios
Bom detalhe nuclear.
Toxicidade elevada.
Picratos
Bom detalhe nuclear.
Ácido pícrico e Líquido de Bouin.
42
como escolhemos o fixador de acorod com a natureza das estruturas a fixar ?
Classificamos um fixador por: qual é o melhor para os ácidos nucleicos, qual o melhor
para os lípidos … etc.
Ácidos Nucleicos
* DNA +RNA + proteínas → núcleo.
* Maioria dos fixadores parecem não reagir com o DNA e RNA.
* Fixadores ideais: Álcool acético e a solução de Carnoy.
* Fixador + utilizado: formalina → só reage com o DNA a 65℃ e com RNA a 45℃.
* A fixação ocorre habitualmente para a estabilização das proteínas nucleares.
Lípidos
* Vários fixadores preservam os lípidos.
* Fixadores ideais impedem a sua remoção durante fases posteriores da técnica
histológica: Formalina tamponada 10%; Tetróxido de ósmio e o ácido crómio.
Glícidos
* Vários glícidos perdem-se durante a fixação e alguns deles quando preservados
(glicogénio, glucose) tornam-se num fator que dificulta a fixação de proteínas.
* Fixadores ideais: Carnoy’s, Gendre’s, formalina alcoólica ácida, álcool absoluto,
Metacarn.
Proteínas
* Estrutura primária → é determinada pelo arranjo de ligações covalentes entre os
aminoácidos.
* Estrutura secundária → é determinada por pontes de hidrogénio entre várias
componentes da cadeia peptídica.
* Estrutura terciária → pontes de hidrogénio, ligações iónicas e ligações hidrofóbicas =
estrutura frágil e muito reativa com fixadores aditivos.
* Fixadores aditivos → alteraram a estrutura das proteínas terciárias por alterarem cargas elétricas no ponto onde vão estabelecer ligação.
* Fixadores não aditivos coagulantes → proteína terciária insolúvel.
* Fixadores ideais para uma proteína secundária podem não o ser para estruturas
terciárias (ex.: metanol e o etanol).
* Fixador ideal: Clark-Carnoy, Carnoy, Metacarn.
43
quais sao os 3 fixadores mais utilizados em AP ?
Formaldeído
Líquido de Bouin
Etanol
44
o que é o formaldeido ?
É um gás, é utilizado em solução aquosa para podermos fazer fixação dos tecidos – aqui
já falamos de formalina.
* É o aldeído mais simples.
* Forma molecular H2CO.
* Nome oficial IUPAC –Metanal.
* Fixador aditivo, não coagulante.
* Une cadeias proteicas (polimerização), formando pontes entre as proteínas.
* É o fixador universal em Histopatologia.
* Como foi referido anteriormente o formaldeído é um gás obtido a partir do
Paraformaldeído que é: sólido estável, insolúvel em água, constituído por polímeros de
alto peso molecular (polioximetilenoglicol).
* A forma sólida é dissociada em água a em condições ligeiramente alcalinas (adicionar NaOH até pH=7.2).
* Quando aquecido (60℃), em solução aquosa em condições ligeiramente alcalinas (NaOH até pH=7.2), gera um gás – o Formaldeído.
* Formaldeído: é o fixador, gás incolor, caracterizado pelo seu cheiro muito forte, inflamável.
* Formol ou Formalina: solução aquosa de Formaldeído, sendo solúvel em água até 40% (máximo).
* Como fixador de tecidos, a formalina é usada a uma concentração de 10% em solução aquosa (formaldeído a 4%).
* As soluções comerciais (37-40%) – formalina absoluta em laboratório –contêm cerca de 10% de metanol, que tem como função evitar a
polimerização do metilenoglicol.
* Em solução aquosa coexiste com a sua forma hidratada (metilenoglicol), podendo
polimerizar sob a forma de um precipitado branco (polioximetilenoglicol).
* Segundo a reação de Cannizzaro, quando 2 moléculas de formaldeído interagem, 1 é reduzida a metanol e a outra oxidada a Ácido fórmico (iões formato).
* Fosfato monobásico e dibásico – Formalina Tamponada ou Formalina Neutra.
* Penetra rapidamente e de forma uniforme nos tecidos.
* Endurece moderadamente os tecidos.
* Provoca pouca retração.
* Fixador lento: fixa entre 6 e 48h (8h:1mm).
* Não precipita proteínas.
* Preservar o tecido adiposo.
* Fixar lípidos complexos (fosfolípidos).
* Não atua em gorduras neutras.
* Tempo máximo de fixação: indeterminado, após alguns
meses as colorações tornam-se difusas.
* Formaldeído o fixador de eleição em AP.
* IARC Grupo 1: o formaldeído é considerado uma substância carcinogénica, ligada ao cancro da nasofaringe e em alguns estudos está associado a leucemia. É necessário que
a exposição com formaldeído seja controlada para evitar que se esteja tão facilmente
exposto e, portanto, trabalha-se com ele na hotte.
45
o que é o liquido de bouin ?
* Constituído por: Ácido pícrico, Formaldeído a 37-40% e Ácido acético.
* Fixador mais indicado para alguns exames histoquímicos como é o caso do tricrómio de
masson.
* Preserva bem os aspetos gerais da célula com um bom detalhe nuclear.
* Utilizado em gânglios: aspeto fluorescente VS tamanho reduzido.
* A coloração amarela conferida pelo Ácido pícrico pode ser removida com etanol 50% ou a 70% ou etanol 70% saturado com Carbonato de lítio.
* Fixador rápido: fixa entre 4 e 24 h (4h:1mm).
* Tempo de fixação máximo: 8 dias, após este tempo os fragmentos endurecem
excessivamente, dificultando o corte.
46
o que é o etanol ?
* Líquido incolor, inflamável.
* Fixador coagulante, não aditivo – desnatura e coagula todas as proteínas do tecido
exceto das nucleoproteínas.
* Utilizado preferencialmente para a preservação de componentes do tecido solúveis em água (ex.: glicogénio).
* Dissolve os lípidos.
* Torna o fragmento duro e quebradiço.
* Faz desaparecer todos os grânulos e pigmentos acidófilos.
47
O laboratório de AP recebe vários tipos de material biológico, provenientes de ?
* Patologia Cirúrgica
Peças cirúrgicas e Biópsias.
Exames extemporâneos – exames de urgência, onde a pessoa está no bloco
operatório e é retirada uma amostra de forma rápida, depois é feito um corte de congelação e uma coloração rápida de hematoxilina-eosina, o patologista a partir deste momento pondera se vai fazer uma cirurgia mais conservativa ou não.
* Necrópsia
* Amostras citológicas (consultas, exames especiais, cirurgia)
Consultas – exemplo: Para uma consulta de ginecologia, a fim de fazer o rastreio do cancro do colo do útero, é retirado uma amostra para fazer-se citologia em meio líquido ou em esfregaço (cada vez mais em meio líquido por causa da genotipagem para o HPV)
Exames especiais – exemplo: punções por agulha fina, que são amostras também provenientes da citologia, seja da medula óssea, da tiroide, da mama, etc.
48
o que é uma peça cirurgica ?
* É obtida por cirurgia (internamento ou ambulatório).
* Objetivo: promover o tratamento de uma patologia ou efetuar uma terapia paliativa.
* Incluí, frequentemente, toda a lesão (retira-se todo o tumor).- Órgãos, partes de órgãos.
* Maior dimensão que a biópsia.
* 31077 (códigos de faturação) – Exame macroscópico e histológico de peça de resseção cirúrgica ou de feto com 11 semanas ou menos.
* 31097 – Exame macroscópico e histológico de peça de resseção cirúrgica com disseção ganglionar e/ou avaliação da margem circunferencial e/ou mapeamento – servem para
estudar se os gânglios estão comprometidos e se há metastização.
49
quais sao os exemplos de pecas cirurgicas simples?
* Apendicectomia (remoção de apêndice ileocecal)
* Amigdalectomia por tumor (remoção da amígdala palatina)
* Esplenectomia (remoção do baço)
* Hepatectomia parcial/ segmentar (remoção do fígado)
* Mamoplastia (redução mamária)
* Ooforectomia ou salpingo-ooforectomia (remoção de ovário, ovário e trompa)
* Nefrectomia (remoção do rim)
* Orquidectomia (remoção do testículo)
* Histerectomia (remoção de útero)
* Colecistectomia (remoção da vesícula biliar)
50
quais sao exemplos de pecas cirurgicas completas ?
* Apendicectomia por tumor
* Cistectomia por tumor (bexiga)
* Colectomia segmentar ou hemicolectomia (cólon), Colectomia total (cólon)
* Esofagectomia (esófago)
* Gastrectomia parcial ou total, por tumor (estômago)
* Laringectomia parcial ou total, por tumor (laringe)
* Glossectomia ou hemiglossectomia, por tumor (língua)
* Mastectomia parcial ou quadratectomia (mama), Mastectomia radical (mama)
* Prostatectomia radical (próstata) – toda a próstata tem de ser estudada e um caso chega a levar cerca de 60 cassetes, e para perceber de que zona são os tecidos na próstata marca-se por quadrantes com tintas diferentes os locais.
* Nefrectomia parcial ou radical, por tumor (rim)
* Conização (colo uterino)
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o que é uma biopsia ?
* Porção de tecido obtida para estudo anatomopatológico.
* Objetivo: obter um diagnóstico de uma lesão que não foi possível obter por métodos clínicos, definição terapêutica (e.g. biópsia da mama).
* Tamanho reduzido (temos de ter o maior cuidado para não a perder).
* Pode ou não incluir toda a lesão (excisional ou incisional), normalmente não inclui, mas há uma exceção, por exemplo, para um nevo – neste caso remove-se na sua totalidade, tratamos a lesão como biópsia de tamanho reduzido.
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quais sao alguns exemplos de biopsias ?
* Biopsia de amígdala, bexiga, brônquio, cólon, duodeno, esófago, estômago, mama,
próstata, uretra, útero, etc.
* Biopsia de baço, fígado, coração, gânglio linfático, medula óssea, nervo, osso, rim, etc.
* Biopsia de transplante cardíaco, renal ou hepático.
* Restos ovulares, resseção transuretral (vesical e prostática), canais deferentes,
polipectomia (pólipo no trato gastrointestinal), biopsia incisional ou excisional de
tecidos moles (inclui lipoma, até 3 cm), pele e anexos cutâneos (incisional ou excisional, até 3 cm), etc.
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quais sao os meios de obtencao de biopsias ?
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