¿Qué es la prueba de neutralización por reducción en placas?
Es una técnica serológica que mide la capacidad de los anticuerpos para neutralizar un virus y evitar que infecte células en cultivo.
¿Por qué la prueba de neutralización en placa es importante para el dengue?
Porque es altamente específica y permite confirmar infecciones y medir anticuerpos neutralizantes contra el virus del dengue.
¿Qué se evalúa con la técnica de neutralización en placa?
Se evalúa la capacidad neutralizante de los anticuerpos en el suero y el título viral necesario para reducir la infección en un 50 por ciento.
¿Qué tipo de células se utilizan comúnmente en esta técnica?
Se emplean líneas celulares de mamíferos como BHK21
¿Cuál es la línea celular más usada en el método de placas para dengue?
Las células BHK21 derivadas de riñones de hámsters sirios recién nacidos que permiten una replicación viral eficiente.
¿Qué otros virus pueden cultivarse en células BHK21?
Virus de la rabia
¿Cuál es el principio del método de neutralización en placa?
Consiste en mezclar diluciones de suero con una suspensión viral e incubarlas sobre una monocapa celular para observar si se forman o no placas de infección.
¿Qué representa una placa en este método?
Una zona de lisis o destrucción celular causada por la replicación viral.
¿Qué indica la ausencia de placas en un pozo?
Que los anticuerpos neutralizaron el virus impidiendo la infección de las células.
¿Qué indica la presencia de placas en un pozo?
Que el virus no fue neutralizado y las células fueron infectadas.
¿Qué significa el punto final del 50 por ciento de reducción de placas?
Es la dilución del suero que reduce a la mitad el número de placas respecto al control y refleja la potencia de neutralización del suero.
¿Por qué la línea celular usada puede afectar los resultados?
Porque la capacidad de neutralización depende del tipo de célula y del grado de madurez del virión que infecta.
¿Qué papel cumple el Instituto Nacional de Salud en el Perú respecto a esta técnica?
Realiza la prueba de neutralización como método confirmatorio en la vigilancia del dengue y estudios epidemiológicos.
¿Qué otras pruebas se emplean para el diagnóstico del dengue además de la neutralización en placa?
ELISA de captura de IgM e IgG
¿Cómo se preparan las diluciones del suero en la prueba?
Se preparan diluciones seriadas de 10⁻¹ hasta 10⁻⁷ mezclando suero con virus y se incuban a 4 grados durante toda la noche.
¿Qué sucede después de incubar el suero con el virus?
Se inoculan 50 microlitros de la mezcla en pocillos con células BHK21 y se incuban a 37 grados con 5 por ciento de CO2.
¿Por qué se agrega una capa de carboximetilcelulosa?
Para formar un medio semisólido que limita la difusión del virus y permite visualizar las placas individuales.
¿Cuánto tiempo se incuban las placas antes de la lectura?
De 7 a 10 días hasta que las placas sean visibles y puedan teñirse con colorante.
¿Qué colorante se usa para visualizar las placas de infección?
Naftol Blue Black que tiñe las células y resalta las zonas infectadas.
¿Cómo se interpreta un resultado positivo en la neutralización?
Como la ausencia de placas indicando que el suero contiene anticuerpos neutralizantes contra el virus.
¿Cómo se interpreta un resultado negativo en la neutralización?
Como la presencia de placas indicando que no hubo neutralización del virus.
¿Cuál es la fórmula para calcular el título viral en UFP por mililitro?
Título igual a P por 10 elevado a x por V donde P es el número promedio de placas
¿Qué valor se usa en la fórmula cuando el volumen del inóculo es 50 microlitros?
Se multiplica por 20 quedando la fórmula Título igual a P por 10x por 20.
¿Qué factores pueden optimizarse para mejorar la sensibilidad del ensayo?
La densidad celular
