Qu’est-ce qu’une substance amphotère?
Substance qui peut se comporter selon le cas comme un acide ou une base en libérant ou en acceptant des ions H+. Parmis ces substance on retrouve les acides aminés.
Donner la définition de «ion dipolaire» ou «zwitterion» et expliquer dans le cas des acides aminés
C’est une molécule ayant des groupes séparés chargés positivement et négativement.
Pour les acides aminés, c’est lorsque les groupements acides carboxylique et aminés sont tout les deux complètements ionisés.
À quel pH un acide aminé sera-t-il un ion dipolaire?
À pH physiologique, appelé point isoélectrique
Combien retrouve ton de fraction dans un électrophorèse de protéines sérique et comment les nomme t-on?
On retrouve 6 fraction sous la courbe : albumine, alpha1, alpha2, bêta1, bêta2, gamma globuline.
Après l’électrophorèse des protéines sériques, on obtient un graphique dont l’aire sous la courbe est de 11,9cm2. L’aire sous chacun des pics représentant l’albumine, les alpha-1, les alpha-2, les bêta et les gamma globulines est, dans l’ordre:
7,0. 0,5. 1,4. 1,2. 1,8. Cm2
Quel est la valeur en g/L de ces différentes fractions? Sachant que la valeur totale des protéines est de 68g/L.
Calculons la proportion d’albumine par rapport aux protéines totale:
Aa 7,0cm2
— =. ——– = 5,8%.
A1. 11,9cm2
En effectuant le même calcul pour chacune des fractions on obtient:
Alpha-1 globuline = 4,2%
Alpha-2 globuline = 11,8%
Bêta globuline = 10,1%
Gamma globuline = 15,1%Sachant que la valeur totale des protéines est de 68g/L, on sait donc que les différentes fractions contiennent respectivement: 4, 3, 8, 7 et 10g/L.
Expliquez le principe de l’électrophorèse des protéines sériques au réfractomètre?
Lorsqu’un faisceau de lumière frappe une solution, il l’a traverse en diminuant de vitesse et en changeant de direction: on dit que ce faisceau est réfracté.
- L’amplitude de réfraction s’exprime en indice de réfraction.
- L’indice de réfraction correspond à la masse volumétrique (densité) de l’échantillon.
- L’indice de réfraction est propre à chaque substance.Quels sont les utilités du réfractomètre?
- Mesurer des protéines totales du sérum : une petite variation des autres constituants n’a pas d’effet significatif sur l’indice de réfraction.
- Mesurer la densité des échantillons d’urine: l’indice de réfraction est directement proportionnelle à la masse total de solides dissout.
Nommez les différents types de supports et expliquer celui qui est le plus populaire.
- Acétate de cellulose
- Gel d’acrylamide
- Gel d’agarose : l’agar obtenu à partir d’algue rouge, agarose est une fraction purifiée pour disposer en couche mince à une concentration de 5 à 10g/L. L’agarose n’a pas d’effet électro-endosmose.
ADN: pour séparer des molécules de grande tailles 0,8-1% 500-10 000pb porosité.
Protéines: plus que 200KDa
Durée d’électrophorèse entre 30 et 90 minutes.
Gel de filtration: charge, grosseur et forme sont phénomènes impliqués.
Nommez les 6 facteurs d’influence de l’électrophorèse de zone et décrivez les.
Charge globale:
Plus la molécule est chargée plus elle migre vite
Masse et forme du composé:
La force de frottement entre le support et la molécule ralentit la migration. Donc, une molécule lourde se déplacera difficilement et une molécule plus légère se déplacera plus facilement.
Le pH du milieu:
La solution tampon est aussi constituée d’ions qui peuvent interagir avec les composés à séparer en les attirants et ainsi en modifiant leur mobilité. Plus il y a d’ions dans la solution tampon, plus il y a de courant électrique transporter par rapport à la quantité transportée par les ions de la substance à séparer donc la vitesse de migration est réduite.
L’intensité du courant: I où V=RI donc I=V/R
Plus l’intensité du courant est grande, plus la vitesse de migration est grande.
L’intensité du courant (I) dépend de la résistance R et de la tension (V) aux bornes des électrodes.
Type de support:
Fait varier la vitesse de migration des composés à séparer.
Électro-endosmose:
Les charges positives restent près de la parois du support et sous l’influence du champs électrique, ces charges + se déplacent vers la cathode.
Par viscosité, elles vont entraîner les molécules d’eau qui les entourent ce qui peut interférer avec la migration des composés à séparer.
Nommez 3 raison du pourquoi on fait des électrophorèse.
- Pour faire la séparation :
- des protéines sériques
- des protéines urinaires
- des protéines du liquide céphalo-rachidien
- des isoenzymes d’une enzyme ( créatine kinase et déshydroénase lactique ).
-des lipoprotéines - On y fait l’étude des différentes formes de l’hémoglobine.
- C’est une méthode de séparation et aussi une méthode d’analyse qui peut servir à poser un diagnostic par l’interprétation de résultats.
Nommer les différentes étapes de l’immuno-électrophorèse.
- Dans un premier temps, on place le mélange à séparer dans un petit puit pratiqué dans une plaque de gel à électrophorèse; on procède alors à une électrophorèse de zone. Les différents composés migrent sur des distances variées leurs sont propres, selon leur mobilité électrophonétique.
- On arrête alors l’électrophorèse et on ajoute l’antisérum. Les anticorps et les composés à séparer (Ag), diffusent (par capillarité ) à des vitesses qui leur sont caractéristiques et se rencontrent à un endroit quelconque dans le gel pour former des complexes Ag-Ac.
- Les complexes Ag-Ac sont insolubles et, par conséquent, précipitent formant ainsi des arcs de précipitation. La position de ces arcs est différente selon les antigènes; c’est ainsi qu’on obtient la séparation des différents composés, Ag. Les arcs de précipitation représentent donc les différents composés initialement contenus dans le mélange.
Nommer 2 avantages à l’électrophorèse capillaire
- La séparation rapide : automatisé, temps de migration court. Capillaire de silice fondu 25-75um diamètre intérieur. Voltage augmenter 10 000 à 30 000v.
- La résolution très élevée
- Les capillaires possèdent une haute résistance électrique : la résistance du capillaire limite le courant qui passe dans la silice et diminue la température interne (dans le tampon), limite la chaleur dans le capillaire.
- Volume d’échantillons très faible : 1 à 50ul
- Quantification à l’aide d’un détecteur : directement dans le capillaire.
Remplir les case vides :
Lorsqu’on applique une différence de__________ aux extrémités d’un__________ contenant une ____________ _____________, il se produit un déplacement du ____________.
Le ____________ migre de ___________ vers ____________.
Le déplacement du ___________ dans le _____________ est une conséquence de la ____________ de la ___________ _____________ du ____________.
Le ________ résulte de l’effet du _________ _______________ sur la ___________ ____________ qui existe à l’interface capillaire/tampon.
- Potentiel
- Capillaire
- Solution d’électrolytes
- Tampon
- Tampon
- L’anode
- La cathode
- Tampon
- Capillaire
- Charge
- Parois interne
- Capillaire
- FEO
- Champs électrique
- Double couche
Comment se nomme le groupement qui fait en sorte que les silice fondue devient chargée à des pH supérieur à 4?
Les groupements silanols SiO-
Expliquez la vitesse de migration des différentes molécules :
Petites molécules chargées + :
Grosses molécules chargées + :
Molécules neutres :
Grosses molécules chargées - :
Petites molécules chargées - :
Petites molécules chargées + :
Moins de friction et charges + plus grandes que celles du FEO donc, migrent plus vite que le FEO vers la cathode.
Grosses molécules chargées + :
Plus de friction, mais migrent plus vite que le FEO vers la cathode.
Molécules neutres :
Avancent à la même vitesse que le FEO et ne sont pas séparés.
Grosses molécules chargées - :
Plus de friction, donc elles sont plus amenées avec le FEO.
Petites molécules chargées - :
Moins de friction, donc elles sont moins amenées avec le FEO.
Comment se nomme le système qui permet à la migration de se maintenir à des températures constante?
Le système Peltier : lorsque le voltage monte à des 8000 ou 10 000 volts, la température du capillaire tend à vouloir monter, le système Peltier, permet de maintenir la température des capillaires à 35C.
Nommer le chemin vers la cellule de détection des fractions séparées par spectrophotométrie d’absorbance.
Lampe deutérium, filtre de sélection des absorbance, fibre optique, capillaire, détecteur photodiode et la carte CCD.
Quel est le rôle des tampon 1 et 2? Et à quel endroit se fait la migration dans le capillaire?
Le rôle du tampon 1 et 2 est de sonder et de faire la dilution 1/5 des échantillons.
La migration dans le capillaire se fait dans le tampon d’analyse.
Quel sont les 5 rôles de la seringue et de la valve à 8 voies?
- Permet la dilution 1/5 de l’échantillon.
- Permet le lavage du capillaire (en sens inverse)
- Met le tampon dans la cuve anodique.
- Permet l’aspiration de l’échantillon dilué dans le capillaire.
- Permet le lavage de la sonde.
Expliquer chacune des parties de la cupule de dilution au minicap.
Échantillons 1 et 2 :
Sont dilués 1 dans 5 par la sonde avec le tampon d’analyse pour un volume totale d’environ 150-200ul.
Cuve anode :
Contient du tampon d’analyse ddp entre anode et cathode.
Le liquide varie selon l’analyse.
Le réservoir cathode (-) est scellé et rincé avec de l’eau distillée entre 2 types d’analyses différentes.
Le réservoir de l’anode (+) n’est pas scellé.
Les résultats sur capillaire au minicap sépare les protéines en combien de fraction? Et nommer chacune d’entre elles.
En 6 fraction :
Albumine
Alpha-1
Alpha-2
Bêta-1
Bêta-2
Gamma
