Réplication semi-conservative
Molécule fille contient :
- un brin ADN parental
- un brin ADN nouvellement synthétisé
Démonstration :
Bacs cultivées dans milieu N15 lourd puis transfert dans N14 léger. Puis séparation mol ADN par centrifugation sur gradient CsCl
Synthèse ADN
- Addition de new nucléotides en 3’
- UNIDIRECTIONNELLE
- Amorce
Synthèse brin discontinu : fragments d’Okazaki reliés par ligase
Synthèse fragments d’Okazaki
- Amorce ARN détachées/soulevées de l’ADN par ADN pol du fragment d’Okazaki adjacent
- Amorce ARN forme un rabat et est clivée de ADN par une flap endonucléase
- ADN ligase lie les 2 fragments
Amorce aussi requise pour brin continue
Etapes réplication ADN
- Séparation des 2 brins à l’origine de réplication –> 2 fourches de réplication bidirectionnelles
- Synthèse amorces ARN
- Synthèse brin continu et discontinu
ADN E. Coli
Circulaire ~5.1 Mb
1 SEULE origine de réplication SPECIFIQUE
Définition réplisome
= Ensemble des prots présentes dans fourches de réplication qui permettent réplication ADN
Que contient le réplisome d’E. Coli ?
- un facteur de chargement (clamp loader) : 1 sous-unité delta, 1 delta’, 3 tau
- prots beta-clamps
- ADN pol III
- Hélicase DnaB : 6 sous-unités et liée à DnaG. C’est une ATPase de type RecA. Se déplace 5’–>3’ (encercle brin discontinu)
- ARN primase DnaG : contient 1 domaine liaison Zinc, 1 domaine ARN pol, 1 domaine liaison hélicase. Synthétise amorce ARN
Sous-unités tau du facteur de chargement clamp loader
Extention en C-term qui se lie à DnaB et ADN pol-III
Sous-unités tau peuvent être tronquée en C-term et ne possèdent plus ces motifs de liaison –> sous-unités gamma.
Extention C-term des sous-unités tau
Maintient prots du réplisome –> facilite synthèse brin discontinu
1) 2 ADN pol répliquent brin discontinu
2) facteur de chargement clamp loader lie prot beta-clamp
3) la charge sur brin discontinu
4) clamp-loader déplace/apporte ADN pol au niveau du nouveau beta-clamp
Moteur ds cell : Exemple de Rad50
ATPases : hydrolysent ATP –> ADP
Sont liées ou non à l’ATP (état lié ou état basal)
A l’état basal, les 2 sous-unités de Rad50 ne sont pas liées
+ ATP –> liaison –> hydrolyse –> dissociation des 2 sous-unités
Autres ATPases : RecA, AAA+ ATPases
