techniques d’observation par microscopie
microscopie optique (structures)
microscropie a fluorescence (localisation de proteines specifiques…)
Microscopie electronique (ultrastructures)
Histologie → observation des tissus
Cytologie → observation des cellules
techniques d’identification et de localisation de molecules
Immunocytochimie, immunohistochimie (prot)
Hybridation in situ (sequence acide nucleique)
Technique de pulse-chase (etude dynamique macromolecules - synthese deplacement)
techniques d’analyse biochimique et de biologie moleculaire: proteines
Electrophorese, chroamtographie (separation des prots)
Western blot (detection d’une prot specifique)
Pulse-chase (etude dynamique du devenir molec d’une prot)
techniques d’analyse biochimique et de biologie moleculaire: acides nucleiques
Electrophorese (separation ADN ou ARN)
Pcr (polymerase chain reaction) (amplification d’ADN)
Sequencage (lecture des sequences de base)
Northern blot (detection arn)
Southern blot (detection adn)
Techniques de manip genetiques (insertion, deletion de gene, clonage
pulse-chase
Technique permettant d’étudier un processus dynamique
Localisation du lieu de synthèse au sein d’une cellule d’une macromolécule donnée et suivi de son déplacement éventuel au cours du temps
Forme synthétisée et devenir d’une protéine au cours du temps (clivage, dégradation)
pulse chase: principe, 2 phases
PULSE: marquage des molécules à étudier pendant un temps court
CHASE: suivi du devenir des molecules marquees pendant le pulse au bout d’intervalles de temps variables
pour marquer une macromolecules, on utilise
un precurseur radioactif
(pour marquer une proteine, on utilise des AA radioactifs)
detection du signal radioactif: autoradiographie
utilisation d’une emulsion photographique dans laquelle se trouvent des cristaux de bromure d’argent
recouvrement de l’echantillon radioactif par cette derniere
Ag+ devient Ag metallique, apparaissant en noir
permet de voir ou est la molec radioactive
tritium is good for this bc on n’aura pas des signaux qui se diffusent trop loin
–> on cherche a savoir le devenir d’une proteine donnee
