Utilité du test à l’antiglobuline
• Détecter les globules rouges sensibilisés par :
1. Des anticorps IgG non agglutinants (ou nommés « incomplets »)
2. Des fractions du complément
La sensibilisation des globules rouges peut se faire :
In vivo
• Anticorps autoimmuns
Autoanticorps
• Maladie hémolytique du nouveau-né
• Réaction transfusionnelle
In vitro
• Dépistage et identification d’anticorps
• Détermination du phenotype érythrocytaire (presence ou absence d’un
antigène)
TDAG:
Permet de détecter la présence de GR sensibilisées in vivo par un IgG ou un composant du complément.
Le composant du complément le plus recherché est le C3d
Sensibilisation des GR causée par certaines conditions
pathologiques.
Coombs direct
Condition clinique
TDAG
1- Maladie hémolytique du nouveau-née (MHNN)
-Anticorps maternels sensibilisent les globules rouges du bébé.
2- Réaction transfusionnelle hémolytique (RTH)
-Anticorps du receveur sensibilisent les globules rouges du donneur.
3 Anémie hémolytique autoimmune (AHAI)
-Autoanticorps sensibilisent les propres globules rouges de l’individu. Et des fois le complément peut sensibiliser les GR.
TIAG:
Permet de détecter la présence de GR sensibilisées in vitro et utilisé dans certaines situations :
1. Détection d’anticorps non agglutinants (dépistage et identification d’anticorps et compatibilité sanguine)
2. Détermination du phénotype des GR à l’aide d’un sérum-test connu
3. Titrage d’anticorps incomplets
Application TIAG:
1.Détection d’anticorps
-Compatibilités sanguines
*Anticorps du receveur réagissant avec les GR du donneur
-Dépistage d’anticorps
*Anticorps réagissant avec des GR de dépistage connus
2.Identification d’anticorps
-Panel d’anticorps
* Anticorps réagissant avec des GR connus de panel d’identification
3.Titrage d’anticorps
-Titre des anticorps Rh
*Anticorps et GR Rh sélectionnés
4.Phénotype globulaire
-Détection des antigènes globulaires (D faible, K, Fy)
*Sérum-test spécifique (anticorps connu) + GR à tester pour détection de l’antigène.
Facteur qui affecte test à l’ antiglobuline:
Ratio sérum (plasma)/GR
Milieux réactionnelle
Température
Durée d’incubation
Lavage des GR
Salive pour lavage
Ajoute d’AGH
Centrifugation
Ratio sérum (plasma)/GR:
• Ratio minimum → 40:1 (2 gouttes de plasma + 1 goutte de GR 2-4%)
• Pour anticorps faible → 4 à 6 gouttes de plasma + 1 goutte de GR 2-4%
Milieu réactionnel
Albumine
• 2 gouttes plasma + 2 gouttes albumine bovine 22% + 1 goutte GR 2-4%
• Incuber pendant 30 minutes (idem si incubé en saline pendant 60 minutes).
• Peuvent ne pas détecter certains anticorps cliniquement significatifs.
LISS
• Habituellement : 2 gouttes plasma + 2 goutte LISS + 1 goutte GR 2-4%
• Aussi possible : suspendre GR dans le LISS (2-4%).
• 10 à 15 min
PEG
• Augmente le taux de fixation de l’anticorps sur le GR
• Réactif de choix pour AGH anti-IgG pour éviter les faux positifs.
• Pas de lecture post incubation 37 C avec PEG → cause agrégation des GR.
• PEG vs LISS : PEG augmente la détection des anticorps cliniquement
significatifs tout en diminuant la détection des anticorps non cliniquement significatifs.
• Bon pour Ac faiblement réactif
Température:
• 37°C (36 à 38)
Durée d’incubation
Milieu salin
• 30 à 120 minutes
• 30 minutes pour la plupart des anticorps cliniquement significatifs
LISS
• 5 à 15 minutes (s’assurer que la durée d’incubation est à 37 tout le temps.)
• Si plus de 15 minutes → élution (détachement) des anticorps
Lavage des GR:
• Minimum de 3 lavages avant d’ajouter AGH → pour retirer les anticorps ou globulines non fixés au globules rouges.
• Lavage inadéquat → faux négatif à cause de la neutralisation de AGH par les globulines résiduelles non fixées
• Effectuer le lavage aussitôt que possible pour éviter l’élution des anticorps à faible affinité.
• Remettre entièrement le culot en suspension avant d’ajouter la saline pour le prochain lavage.
• Décanter la saline complètement après le dernier lavage pour éviter de diluer l’AGH (« Blot dry »).
Saline pour le lavage
• Fraîche, bon pH, bonne concentration, absence de contamination bactérienne (donne des faux négatifs)
Ajout d’AGH:
• Ajouter l’AGH aussitôt après le dernier lavage afin de minimiser l’élution (le détachement) des anticorps et causer une neutralisation de AGH.
Centrifugation
• Vitesse minimale pour 20 secondes
• Remettre doucement le culot en suspension
Faux positif
TDAG
- Spécimen inadéquat (réfrigération, coagulation) peut causer l’attachement du complément in vitro
- Centrifugation abusive
- Centrifugation suite à la phase d’incubation si utilise PEG
- Contamination bactérienne des globules rouges ou de la saline utilisée
- Verrerie sale
- Présence de fibrine dans le tube-test
- Globules rouges ayant un TDAG positif donneront un TIAG positif
- Globules rouges polyagglutinables
- Saline contaminée par des métaux lourds ou des colloïdes
- Utilisation d’un sérum pour TDAG
- Échantillon prélevé dans tube avec gel séparateur (fausse attachement du complément
- Attachement du complément quand spécimens prélevés à partir d’une ligne d’infusion délivrant des solutions de dextrose
- Présence d’anticorps dirigés contre le préservatif du réactif
Faux négatif
TDAG
- Lavage inadéquat des globules rouges (insuffisant, pas assez de saline)
- Nombre de lavages insuffisant quand utilise plus grand volume de plasma
- Contamination du AGH du à protéines étrangères (gants, mauvais compte-gouttes)
- Haute concentration de paraprotéines dans le plasma
- Détachement des IgG liés aux globules rouges dû à une interruption du test
- Détachement des IgG liés aux globules rouges dû à mauvaise température d’analyse (AGH trop chaude ou trop froide)
- AGH non réactif causé par détérioration ou neutralisation (mauvais entreposage du réactif)
- Chaleur excessive ou congélation et décongélation répété du spécimen
- Sérum non réactif à cause de la détérioration du complément
- AGH, plasma ou sérum, solution de rehaussement non ajouté
- Trop ou pas assez centrifugé
- Suspension globulaire trop faible ou trop concentrée
- Pas le bon ratio plasma : globules rouges
- Présence d’anticorps rares qui sont seulement détectable avec AGH polyspécifique et quand complément est présent et actif
- Saline à bas pH
- Conditions d’incubation inadéquate au TIAG
- Mauvaise méthode de lecture finale des résultats
