5.8

Question 1

objetivo ADN recombinante

Answer 1

Aislar, Analizar y Modificar genes.

Question 2

¿Qué son las enzimas de restricción
cual es la mas comun
qué tipo de secuencias reconocen?
que pueden generar
utilidad

Answer 2

Son endonucleasas bacterianas que cortan el ADN (rompen enlace fosfodiéster).
+ común-> EcoRI
reconocen palíndromos-> simetría rotacional binaria
puede generar extremos cohesivos o romos
se usa como huella digital del ADN

Question 3

¿Cómo se obtiene ADN recombinante?

Answer 3

1. mediante endonucleasas bacterianas (EcoRI) hidrolizas enlaces fosfodiéster para cortar ADNsde interés y el vector con la misma enzima
2. obtienes extremos cohesivos complementarios
3. mediante ligasas unes esos extremos mediante nuevos enlaces fosfodiestes
4. mediante un vector (plásmido) transportas ese gen a la célula huésped y se replica autónomamente

Question 4

tipos de vectores para adn recombinante

Answer 4

trozos pequeños adn: plásmido-> pBR322

trozos grandes adn:
- bacteriófagos-> fago
- cósmidos. mitad plásmido, mitad fago landa
- cromosomas artificiales bacterianos-> clonan fragmentos MUY largos adn
- cromosomas artificiales de levadura-> céls eucariotas, en bacterias no funciona. cerveza. para los fragmentos mas grandes de todos

Question 5

banco de genes que almacena una colección de genes clasificados y preparados para su utilización en experimentación. suele usar bacteriófago

Answer 5

genoteca
Se corta el genoma -> se empaqueta en virus -> se infectan bacterias. Cada clon guarda un fragmento distinto, pero juntos forman el genoma completo.

Question 6

¿Qué es una genoteca de cDNA, qué enzima clave utiliza y cuál es su principal ventaja?

Answer 6

colección de clones de ARNm
transcriptasa inversa
Solo contiene los genes que se están expresando (transcribiendo) en ese momento, sin intrones ni ADN basura.

Question 7

¿Cuál es la principal limitación de usar bacterias (E. coli) para expresar proteínas humanas y cómo se soluciona?

Answer 7

Las bacterias (procariotas) NO pueden realizar modificaciones post-traduccionales complejas, como la glicosilación o cortes específicos. en su lugar se usan céls hospedadoras eucariotas (levaduras)

Question 8

define mutagénesis dirigida y tipos

Answer 8

técnica para realizar mutaciones en ADN in vitro (editar la secuencia)
1. Sustituciones
2. Inserciones-> cassette
3. Delecciones-> oligonucleótido
4. Genes diseñadores

Question 9

¿Qué es el sistema CRISPR-Cas9 y cuáles son sus dos componentes principales? y utilidad

Answer 9

técnica de edición genética basada en el sistema inmune adaptativo (autovacunas) de bacterias y arqueas

Componentes:
1. ARN Guía: dirige el complejo al lugar específico del genoma

Cas9: endonucleasa que corta el ADN en el sitio indicado por el guía

Usos: Permite silenciar genes o repararlos/modificarlos con alta precisión.

Question 10

¿Qué es el siRNA y cuál es su función principal en biología molecular?
como puede introducirse

Answer 10

ARN pequeño (20-25 nucleótidos) de interferencia
se une específicamente al ARNm diana y produce su degradación, impidiendo su traducción.
- molécuña sintética o expresarse desde vector como shARN

Question 11

que son ratones knockout

Answer 11

ratones transgénicos que se les ha introducido un gen nuevo o se les ha eliminado un gen propio

Question 12

¿Cuál es la diferencia entre un ratón transgénico y un “Knockout”, y en qué estructura celular se realiza la microinyección?

Answer 12

Transgénico: Se le introduce un gen nuevo (ganancia de función). se controla mediante promotores inducidos

Knockout: Se le elimina/inactiva un gen propio (pérdida de función para estudiar qué hace ese gen).

genes se introducen en la línea germinal

Question 13

¿Cuáles son las 3 etapas de un ciclo de PCR y qué ocurre en cada una?

Answer 13

1. Desnaturalización (95°C): Se separan las dos hebras del ADN.
2. Hibridación / Annealing (45-55°C): Los cebadores se unen específicamente al molde (fase crítica).
3. Elongación (72°C): La Taq Polimerasa sintetiza la nueva cadena de ADN (Tªóptima de la enzima). (El proceso se repite 20-30 veces para amplificar exponencialmente).
4. Terminación

Question 14

¿Cuál es la diferencia principal entre PCR convencional y PCR en tiempo real (qPCR)?

Answer 14

La PCR convencional es cualitativa (dice si hay ADN al final), mientras que la qPCR es cuantitativa y mide la cantidad de ADN durante el proceso mediante sondas marcadas con fluorocromos.

Question 15

que tecnicas de hibridación usan electroforesis y transferencia a membrana para identificar secuencias específicas.

La técnica A busca fragmentos de ADN usando una sonda de ADN.

La técnica B busca fragmentos de ARN usando el mismo sistema. ¿Cómo se llama cada una?”

Answer 15

A = Southern Blot (Busca ADN).

B = Northern Blot (Busca ARN).

Question 16

¿Cómo se llama la técnica que consiste en la hibridación de fragmentos marcados (sondas) con secuencias complementarias de ADN o ARN celular, realizada directamente sobre cortes de tejido o preparaciones celulares?

Answer 16

Hibridación in situ.

Question 17

¿Qué herramienta tecnológica consiste en una superficie sólida (vidrio, plástico o silicio) con fragmentos de ADN unidos, que permite analizar la expresión de todos los genes de un genoma casi instantáneamente y comparar niveles entre células sanas y enfermas?

Answer 17

Microarray de DNA (también llamado Chip de ADN o Biochip).

Question 18

En el Método de Sanger, ¿qué ocurre cada vez que un nucleótido modificado (ddNTP) se incorpora al azar durante la síntesis dirigida por la ADN polimerasa?”

Answer 18

La elongación se interrumpe. (Esto genera fragmentos de distintos tamaños que permiten leer la secuencia).