ADN RECOMBINANTE

Question 1

¿Cuáles son los 2 tipos de ADN en las bacterias?

Answer 1

• ADN cromosomico (Escencial→nucleoide)
• Plásmido (No escencial→Le da características nuevas a las bacterias)

Eg→resistencia a los antibioticos

Question 2

¿Qué tipo de enzimas son las enzimas de restricción?

Answer 2

endonucleasas encargadas de romper enlaces fosfodiéster

Question 3

Función de las enzimas de restricción

Answer 3

Es un mecanismo de defensa de las bacterias frente la entrada de ADN foráneo
* Degradan ADN extraño
* No degradan el ADN propio de la bacteria

Question 4

¿Cómo se nombran a las enzimas de restricción?

Answer 4

1. Acronimo de 3 letras cursivas
   * 1° letra es el género de la bacteria
   * 2 y 3° nombre de la especie
2. Letras/números→cepa
3. Número romano→dependiendo el orden en que se descubrieron

Eg→EcoR I

Question 5

Partes de las enzimas de restricción

Answer 5

• Endonucleasa→degrada el ADN extraño, reconocen una secuencia y cortan el ADN
• Enzimas de sistema de modificación (metilasas)→modifican el ADN propio para que no sea degradado

Question 6

¿Cuáles son los tipos de endonucleasas de restricción?

Answer 6

• Tipo I→sitio de corte es lejos del sitio de reconocimiento (1000 pb) y aleatorio (río ⬆️ o río ⬇️)
• Tipo II→reconoce secuencias palindrómicas y sitio de corte =sitio de reconocimiento
• Tipos III→sitio de corte es lejos del sitio de reconocimiento (20-30 pb).
• Tipo IV→reconoce ADN metilado

polindrómica→se lee igual de izq a derecha y visceversa (ANA)

Question 7

¿Cuáles son los 2 tipos de corte?

Answer 7

• Asimétrico (cohesivos)→cortan en sitios ligeramente diferentes y se crean extremos sobresalientes con secuencias de bases no emparejadas.
• Simétrico (Romo)→corta en el mismo lugar, dejando extremos sin ninguna base sobresaliente

Question 8

¿Qué tipo de corte se utiliza para que el ADN externo se una al plásmido de la bacteria?

Answer 8

corte asimétrico

Question 9

V/F se utiliza la misma enzima de restricción para cortar el ADN y el plásmido para que queden las mismas pares de bases

Answer 9

verdadero

Question 10

¿Qué es un vector?

Answer 10

Molécula de doble cadena portadora de un ADN extraño

Question 11

¿Cuáles son los 2 tipos de vectores?

Answer 11

• Clonación→La bacteria que tiene el vector se replica muchas veces. (replicar un fragmento de ADN de interés en una célula huésped)
• Expresión→La bacteria que tiene el vector tiene la info. suficiente para formar una proteína

Question 12

Partes de un vector de clonación

Answer 12

1. origen de replicación: “marca de inicio” que permite que el vector se duplique dentro de la célula.
2. sitio múltiple de clonación: secuencia reconocida por las enzimas de restricción para insertar el ADN complementario.
3. Marcador de selección: gen incorporado en un vector que ayuda a identificar cx. que han sido transformadas exitosamente

Question 13

Ejemplos de marcadores de selección

Answer 13

• Resistencia antibióticos
• Proteína verde fluorescente
  Eg: cx con el vector se pinta de color verde o tiene resitencia a antibióticos

se expresa en las cx. huesped

Question 14

Partes de un vector de expresión

Answer 14

1. origen de replicación
2. sitio múltiple de clonación
3. Marcador de selección
4. Promotor (ayuda a iniciar transcripción)
5. IRES: sitio de entrada a ribosoma (secuencia de nt que permite que los ribosomas inicien la traducción)
6. secuencia de poliA

Question 15

tipo vector

plásmidos

Answer 15

• Tiene doble cadena de ADN (dsDNA)
• circulares
• separados del ADN cromosomico
• localización: bacterias y levaduras

Question 16

tipo vector

bacteriófagos

Answer 16

• virus que infectan a bacterias
• se modifican genéticamente (eliminan genes que no se requieren para la replicacipon y empaquetamiento)

Question 17

tipo vector

cósmidos

Answer 17

Vectores híbridos (plásmido + bacteriófago)
* plásmido: gen de resistencia antibióticos y sitio origen
* bacteriófago: sitio cos

Question 18

Función de los sitios cos

Answer 18

Secciones cortas de ADN que son necesarias para el empaquetado del ADN dentro de partículas virales (transporte)

Question 19

tipo vector

fagémidos

Answer 19

• plásmido al que se le incorpora el origen de replicación de un fago
• No tiene sitios cos

Question 20

tipo vector

cromosomas artificiales

Answer 20

• BAC (bacterias)
• YAC (levaduras)