Cellanalys

Question 1

Primär immunbristsjukdom

Answer 1

Medfödd genetisk sjukdom orsakad av någon komponent i immunsystemet saknas/inte fungerar.

Exempel:

• Common Variable ImmunoDeficiency (CVID)
• Kronisk granulomatös sjukdom (CGD)

Question 2

Sekundär immunbristsjukdom?

Answer 2

immunbristsjukdom som förvärvats under livet

Exempel:

• AIDS
• immunbrist vid cellgiftsbehandling

Question 3

Autoimmun sjukdom?

Answer 3

sjukdom som orsakas av att immunsystemet aktiveras av och reagerar mot kroppens egna molekyler (självantigener = autoantigener)

Exempel:

• MS
• ledgångsreumatism
• Graves sjukdom
• SLE

Question 4

Allergi?

Answer 4

Tillstånd orsakat av att immunsystemet aktiveras av och reagerar mot ofarliga molekyler i omgivningen eller födan (allergener)

Exempel:

• Nässelutslag
• Hösnuva

Question 5

Hur kan immunbristsjukdom, autoimmun sjukdom och allergier diagnostisers?

Answer 5

Immunologisk metodik (immunoassays)

Question 6

Vad är immunoassay?

Answer 6

En immunoassay är en laboratoriemetod som används för att detektera eller kvantifiera en molekyl med hjälp av den specifika bindningen mellan antikropp och antigen.

Question 7

Immunologiska metoder som används inom klinisk immunologi?

Answer 7

Question 8

ge exempel på cellanalyser inom klinisk mikrobiologi

Nämn också specifik någon analys+metod som görs vid transplantation, autoimmunitet samt vid allergi.

Answer 8

Cellanalyser används ffa för diagnos av:

• immunbristtillstånd
• uppföljning av patienter som genomgår immunterapi
• diagnostik av överaktivitet i immunsystemet (autoimmunitet, allergi).

Question 9

Beskriv cellanalys

• Vilket matrial analyserar man främst ifrån? exempel på nått mer som kan användas
• Hur kan du separera immunceller från röda blodkroppar före analys?

Answer 9

Question 10

Varför behöver man ibland isolera olika typer av immunceller? Hur kan detta göras?

Answer 10

Question 11

2 Olika typer av cellanalyser används, vilka är dem?

Vilken metod används främst för respektive analys typ?Vad gäller den ena analysen kan du analysera detta:

• Analys av upptag av bakterier
• Analys av celldelning
• Analys av aktivering
• Analys av effektormolekyler

Vilka metoder används här?

Answer 11

Question 12

Funktionella cellanalyser kräver ofta att immuncellerna aktiveras i provröret

Olika immunceller kan aktiveras på olika sätt. Hur aktiveras:

• Monocyter/makrofag
• B-cell
• t-cell

Answer 12

Question 13

Berätta om ELISPOT

• Vad står de för?
• Hur får du ut ditt resultat?
• vad används de till?
  *

Answer 13

Question 14

Exempel på olika ELISPOT-analyser som görs för kontroll av b-cells defekter och immunodefekter?

Hur coatar du din platta vid resp analys?

Answer 14

Analys av antal B-celler i ett prov som producerar IgG, IgA eller IgM för diagnostik av patienter med B-cellsdefekter

• Plattor coatade med anti-IgG/A/M antikroppar

Analys av antal B-celler i ett prov som producerar IgG/A/M-antikroppar specifika för mikroorganism eller vaccin (tex stelkrampstoxoid) för diagnostik av patienter med B-cellsdefekter

• Plattor coatade med vaccinantigen

Analys av antal T-celler i ett blodprov som producerar en viss cytokin efter stimulering (tex IFN-γ) för diagnostik av patienter med immundefekter

• Plattor coatade med anti-IFN-γ antikroppar

Question 15

Analys av fenotyp och funktion hos immunceller används ffa för att:

Answer 15

diagnosticera immunbristtillstånd och följa upp patienter som genomgår immunterapier.

Question 16

För att analysera funktionen hos immunceller måste de ofta:

Answer 16

isoleras och stimuleras så att de aktiveras i provröret.

Question 17

För att diagnosticera T-cellsdefekter kan (celldelning):

Answer 17

T-celler stimuleras med antigen eller substans som aktiverar många T-celler och celldelningen kan mätas mha inkorporering av radioaktivt tymidin i DNA.

Question 18

För att diagnosticera B-cellsdefekter kan (antikroppsproduktion):

Answer 18

B-cellerna kan stimuleras och antigenspecifik antikroppsproduktion kan analyseras mha ELISPOT.

Question 19

ELISPOT-tekniken kan användas för:

Answer 19

• analys av immuncellers funktion
• analys av t-cellsdefekter
• analys av b-cellsdefekter
• detektion av celler som producerar cytokiner eller andra effektormolekyler

Question 20

Vad är flödescytometri?

• Vad står de för?
• Vad står facs för?
• Hur fungerar analysen
• När är den bra att använda
• när används den kliniskt

Answer 20

Flödescytometri:

Flow= flöde cyto=cell metri=analys/mätning

FACS= flouorescens activated cell sorting

• Automatiserad analys, kan analysera flera egenskaper samtidigt
• Väldigt bra metod för att kunna särskilja olika immunceller och studera dess form och funktion.
• I klinisk immunologi används de för att konc bestämma proteiner i lösning och analysera immunceller

Funktion: Celler/partiklar analyseras baserat på ljusspridning och flouroscens. Ofta används flourokrom inmärkta antikroppar med specifika ytmolekyler för att skilja immuncellerna åt.

EX: CD3 på t-celler, CD19/20 på b-celler

*Kan analysera och sortera

Question 21

Exempel på flödescytometriska analyser?

Answer 21

Question 22

hur fungerar en fluorokrom?

Vad kan de användas till

Answer 22

Question 23

Genom att använd flera olika antikroppar märkta med olika fluorokromer samtidigt möjliggör?

• Ytmarkörer
• intracellulära markörer
• Kombination

Answer 23

att analysera olika celltyper och deras funktion samtidigt.

Question 24

Flödescytometri

beskriv arbetsflödet

Answer 24

Question 25

Flödescytometerns olika delar:

Answer 25

Question 26

Flödescytometri – **metodprincip** * **Hydrodynamisk fokusering** * **Varje cell genererar?** ​Flödescytometer mäter: * **Forward scatter** * **Side scatter** * **Flouroscensintensitet** * **en prick =**

Answer 26

Question 27

Datanalys mha olika typer av FACS-plottar vid flödescytometri ## Footnote **vad heter de olika plottarna?**

Answer 27

Question 28

skillnaden på dataanlyserna?

Answer 28

Question 29

Exempel på flödescytometriska metoder? * cellanalys * analys av proteiner i lösning

Answer 29

Question 30

beskriv ett Fagocytostest – ”Phagotest” när görs de?

Answer 30

vid immunbristtillstånd

Question 31

Flödescytometrisk analys av intracellulär cytokinproduktion, berätta

Answer 31

Genom att stimulera t-celler i provet mha exempelvis antigen så att många t-celler aktiveras kan vi analysera cytokinproduktion hos individuella hjälpar t-celler. De möjliggör att uppskatta frekvensen antigenspecifka celler

Question 32

berätta om Kulbaserad flödescytometrisk multiplexanalys av cytokiner (detektion av aktiverade t-cellers cytokin produktion)

Answer 32

Question 33

berätta om Flödescytometrisk cellsortering

Answer 33

Cellerna placeras i olika vätskedroppar (1 cell/droppe). Varje vätskedroppe får olika laddning beroende på vilka flourokromer som detekterats på cellen. Dropparna sorteras med hjälp av elektromagneter

Question 34

Flödescytometri gör det möjligt att?

Answer 34

automatiskt analysera och sortera ett stort antal celler eller partiklar i vätskelösning på kort tid.

Question 35

I flödescytometern passerar celler eller partiklar:

Answer 35

en laserstråle en och en och ljusspridning och fluorescens från varje cell/partikel detekteras.

Question 36

Ljusspridning ger information om:

Answer 36

cellens storlek och granularitet

Question 37

Fluoroscens från fluorokrommärkta antikroppar kan ge information om

Answer 37

cellens identitet och funktion

Question 38

Flödescytometri används för att bestämma med (fenotypisk analys):

Answer 38

antal och frekvens av olika immunceller i blodet (fenotypisk analys).

Question 39

Genom att använda fluoroscerande bakterier kan fagocyternas förmåga att

Answer 39

fagocyternas förmåga att fagocytera analyseras.

Question 40

Genom att permeabilisera cellmembranet kan

Answer 40

intracellulära molekyler såsom cytokiner analyseras

Question 41

Florecensmärkta kulor kan bla användas för att

Answer 41

räkna antalet celler i ett prov samt för att analysera koncentrationen av olika proteiner (såsom cytokiner och antikroppar)