Labbhandledning Flashcards

Question

Optochin-test

Answer 1

Resistensbestämning görs för att adekvat behandling ska kunna sättas in och att eventuella resistensmekanismer som bakterien kan ha förvärvat ska upptäckas.

Answer 2

**Standardmässigt** utförs resistensbestämning enligt den så kallade **diskdiffusionsmetoden.** Inkubering av denna platta i 16-20 timmar vid 37 grader -\> Antibiotikumet i lappen diffunderar ut i agarn och bildar en koncentrationsgradient Runt lappen bildas en så kallad hämningszon utan bakterieväxt, där storleken är beroende av bakterieartens känslighet och antibiotikakoncentrationen. Hämningszonens storlek anges som zondiametern. Resultatet svaras ut enligt SIR-systemet: * S= sensitiv * I= indeterminant * R= resistent. **Vid en resistent eller indeterminant bakterie kan minsta inhiberande koncentration, MIC, bestämmas med hjälp av tex E-test eller buljongspädningsmetoder.**

Answer 3

Identifikationssystem för Enterobacteriaceae och andra Gram-negativa stavar vilket använder sig av 23 mini biokemiska test och en databas. **Princip:** Ett API strip består av 20 brunnar som innehåller dehydrerade substanser. Dessa test inokuleras med en bakteriesuspension som återupplöser substansen i tuben. Under inkubationen sker metabola processer som ger spontana färgomslag eller färgomslag via tillsatta reagens.

Answer 4

* Svampar är eukaryoter och liknar djurceller. * Svampar är heterotrofer * De saknar klorofyll * Har en liknande cellvägg som växter. * Svampar förekommer runt omkring oss i miljön och vi andas in svampsporer varje dag. * Candida-arter kan förekomma i vår normalflora. * Svampar delas grovt in i jästsvampar, mögelsvampar och dermatofyter.

Answer 5

* Encelliga, runda till ovala. * Cellväggen består av glukan, mannan och kitin. * De växer ofta i krämig form på en agarplatta. Kan se ut som små sammetskuddar med små utskott. * Förökar sig genom knoppning. * De kan bilda pseudohyfer (=en kedja av intakta celler) * kan leva under anaeroba förhållanden (tex vid jäsning). **Exempel på jästsvampar:** * Candida * Cryptococcus

Answer 6

* Trådlikande i sin struktur, har hyfer * De har cellvägg som består av kitin, glukan, mannan. * De är flercelliga, trådformade * rik morfologi i jfr med jästsvampar. * Möglets struktur består av hyfer= långa filament av sammankopplade celler, hyferna bildar mycel. **Ex på mögel.** * Asparagillus * Penicillum * Zygomyceter ex Rhiozopus

Answer 7

* långsamväxande svampar * bildar enzymer som bryter ner kreatin * förekommer främst på tex naglar, hud och hår, **exempel:** * Trichophyton * Microsporum

Answer 8

Svampar som i rumstemperatur liknar mögel vid rumstemperatur och vid 37°C får en jästsvampstruktur.

Answer 9

*Svamp kan färgas med flera olika färgningsmetoder.* **Gram-färgning till jästsvampar** de får då en mer brunaktig färg än de blålila och röda bakteirerna. **metyleneblått för att färga jästsvampar** färgar i första hand döda celler blå. **Cotton-blue används som färgningsmetod vid alla mikroskopiska demonstrationspreparat** ger en blå färg på svamparna.

Answer 10

Påvisande av ägg eller segment i faeces

Answer 11

Tapeprov. Tape appliceras bredvid anus på morgonen och fästes därefter direkt på objektsglas som inlämnas till laboratoriet.

Answer 12

* Enterovius vermicularis, oxyuris (springmask) *ägg+adult* * Ascaris lumbricoides (spolmask) *ägg+adult* * Trichuris trichiura (piskmask) *ägg+adult* * Anchylosoma duodenale (hakmask)

Answer 13

Påvisande av ägg eller maskar i faeces

Answer 14

Schistosomiasis

Answer 15

**Diagnsotik:** Påvisande av ägg i urin, faeces samt biopsy från blåsa eller rektalslemhinna. **Mikroskopiskt prov:** ägg + sniglar (värden)

Answer 16

* *_Entamoeba histolytica_** * *Diagnostik:** Rutinmässig mikroskopi av faecesprov i formalinrör. **Mikroskopiskt:** cystor **_Giardia Lamblia_** Mikroskopi **_Cryptosporidium_** **Diagnostik:** Direktmikroskopi. Cystor

Answer 17

**orsakas av** en parasit som lever i blod. **Släktet Plasmodium.** Det finns främst 4 arter som är humanpatogena (P. vivax, P. ovalae, P. malariae, P. falciparum). **Diagnostik** via blodutstryk och studie i mikroskop.

Answer 18

**Används för att :** _virus cytopatogena_ effekt samt _beräkna viruskoncentrationen._ **När:**Det finns _flera situationen_ när man behöver koncentrationsbestämma andelen virus som är infektionsdugliga men används framför allt vid _resistensbestämningar mot läkemedel._

Answer 19

**Allmänt:** _Handhygien_ * Händerna bör undvika att komma i kontakt med infekterat material. * Bär inte ringar, klockor eller armband under laborationerna. * Torra, nariga eller såriga händer kan lätt infekteras * Efter allt arbete tvättas händerna och desinficeras med handsprit. _Labbrock_ * Hel, framknäppt alt bakknäppt laboratorierock ska alltid bäras. * Laboratorierocken får ej användas utanför laboratoriet, _Hår_ * Långt hår ska bäras uppsatt och huvudduk ska stoppas in under rocken så att den inte hänger ner över arbetsområdet. _Handskar_ * Använd inte plasthandskar när du arbetar med bakterier. * använd handskar vid gramfärgning för att skydda dig mot färgstänk eller om du har sår på fingrar/händer. * Använd handskar vid arbete med virus då alla virus inte kan inaktiveras med alkohol.

Answer 20

förekomsten av virus

Answer 21

**Med PCR spårar man ett smittämnes arvsmassa (DNA/RNA) genom att amplifiera (kopiera) en målsekvens.** **För att denna målsekvens ska kunna amplifieras krävs** det att man känner till hur början och slutet av sekvensen ser ut : så att man kan designa primers. **Primers är små** (15-30 baser) nukleotidsekvenser som är komplementära till 3`-ändarna på den eftersökta sekvensen. **I en realtids-PCR reaktion använder man** fluorescerande molekyler som antingen kan vara i fri form (syber green) eller bundna till en probe för att detektera mål sekvensen.

Answer 22

**Flödescytometri används för att:** analysera partiklar (t.ex. celler) i en suspension, med hjälp av laserljus.

Answer 23

I flödescytometern belyses varje partikel med laserljus. Ljusdetektorer kopplade till en dator analyserar sedan det ljus som skickas från varje partikel. Med hjälp av laserljuset ges ett mått på partiklarnas/cellernas interna komplexitet **(beror bl.a. på hur mycket vesiklar och granulae som finns inne i en cell)** och storlek.

Answer 24

Storleksmåttet benämns **”Forward scatter”**, eftersom mängden laserljus som bryts snett framåt är korrelerat till cellens storlek. Den interna komplexiteten benämns **”Side scatter”,** eftersom granulae och vesiklar gör att ljuset reflekteras åt sidan när cellen träffas av laserstrålen.

Answer 25

**Det man framför allt använder sig av i en flödescytometer är:** fenomenet fluorescens

Answer 26

Det innebär att ett ämne som belyses av ljus med en viss våglängd absorberar detta ljus, för att sedan sända ut ljus av en längre våglängd samt överskottsvärme. Det är egentligen ämnets valenselektroner som absorberar ljuset, och man säger att ämnet ”exciteras” när det absorberar ljuset, eftersom elektronerna kommer till ett högre energiläge. Varje ämne har en speciell excitations- respektive emissionsvåglängd.

Answer 27

* *Celler kan ha en viss naturlig fluorescens – det kallas autofluorescens. ** Autofluorescensen är beroende av vilka ämnen som finns naturligt i cellen. Bland blodceller har **monocyter och neutrofiler högst autofluorescens**, medan **lymfocyter har mycket låg autofluorescens.**

Answer 28

**Vid infärgning av celler kan man använda sig antingen av:** * **fluorescenta ämnen** * **antikroppar (**kovalent bundna till något fluorescerande ämne (fluorokrom)). **De vanligaste fluorokromerna** vid flödescytometri är **FITC** (excitation: blått; emission: grönt), PE (excitation: blått; emission: orange) och **APC** (excitation: rött; emission: mörkare rött). Eftersom flödescytometern har hög känslighet behöver man **normalt sett inte något förstärkningssteg.** **I vissa fall använder man omärkta primärantikroppar och fluorokrommärkta sekundärantikroppar** men det kan lätt uppkomma problem med korsreaktioner mellan olika primär- och sekundärantikroppar.

Answer 29

Kemiskt definierade odlingsmedier finns för många mikroorganismer, men dessa medier är dyra. Dessutom växer de flesta bakterier långsammare på definierade medier.

Answer 30

Flytande substrat kallas buljonger. Fasta substrat används mer än flytande. Fördel med fasta substrat är att man kan urskilja om man har olika bakteriearter i sin odling. Fasta substrat har gjorts gelatinartade genom tillsats av 1-2 % agar.

Answer 31

**En probe är** en nukleotidsekvens märkt med en fluorofor som binder till målsekvensen mellan primrarna. **Den vanligaste typen** av probe är en TaqMan- probe. Den är i sin 5’-ände märkt med en fluorofor, en så kallad reporter och i sin 3’-ände märkt med en quencher. **Exempel på andra typer av prober** är Molecular beacon och FRET-probe.

Answer 32

1. **Amplifiering:** binder proben in till mål-DNA 2. **Elongeringsfasen:** hydrolyseras proben, bryts ned av Taq-polymerasets aktivitet varvid reporter och quencher skiljs åt 3. **Energin** från den fria och reportern mäts av detektorn 4. **Mängden exiciterad fluorfor** mäts i varje cykel, vilket innebär att amplifieringen följs i realtid. Detta åskådliggörs i en kurva.

Answer 33

* Använda agarplattor och övrigt infekterat engångsmaterial ska kastas i speciella RISKAVFALLS-lådor * Objektsglas och andra skärande stickande avfall ska kastas i låda avsedd för detta (liten gul). * Infekterade glaskärl, glasrör och glasflaskor som ska rengöras och steriliseras, läggs i där för avsedda STÅL-behållare med röd klädnypa. * Icke kontaminerad disk märks med grön klädnypa. * Allt infektiöst avfall autoklaveras innan det senare går till förbränning.

Answer 34

**Sår- och hudavskrapningar** Tvätta noggrant med rinnande vatten och eventuellt med tvål. Rengör därefter med huddesinfektionsmedel. **Infekterat material i munnen** Spotta om möjligt ut det infekterade materialet. Svälj inte! Skölj munhåla och svalg med riklig mängd desinfektionsmedel (70 % sprit) eller vatten. **Ögon** Gnugga ej. Skölj med ögonkopp eller sköljflaskor. Använd endast vatten, ögonbad eller fysiologisk koksaltlösning.

Answer 35

I odlingsmedierna växer inte bara bakterier och virus från patientprov utan även bakterier och virus från dig och din omgivning. För att undvika föroreningar av proven är det därför viktigt att arbeta så sterilt som möjligt. * Fingra inte på pipettspetsar, korkar, plastinösöglor eller bomullspinnar. * Lägg inte pipettspetsar, plastinösöglor eller bomullspinnar på bordet. * Sätt på locket direkt efter att du använt ett provrör eller en agarplatta. * Undvik om möjligt att placera korkar och lock på bänken. * Sätt aldrig tillbaks upptagna saker i sterila förpackningar. * Öppna om möjligt inte hela pipettlådor om de är sterila, öppna en del i taget.

Answer 36

Teknik som bygger på att detektera en antikropp eller ett antigen i ett prov. **Kvalitativt** Ger positivt/negativt svar (ja/nej) En **cut-off** nivå för att visa om provet är positivt eller negativt. Detta beräknas oftast statistiskt och en eller två standardavvikelser används för att avgöra gränsen för pos/neg. **Kvantitativ** Provets densitet relateras till standardkurva, vanligen en seriespädning av en känd koncentration av den undersökta substansen

Answer 37

1. Antigen tillsätts brunn 2. Antigen binder till laddad plast i brunnen 3. Tvätt 4. Icke-reaktivt protein tillsätts för att blockera fria platser som inte är coatade med antigen 5. Primär antikropp tillsätts och binder till antigen under inkubering 6. Tvätt 7. Sekundär antikropp (märkt med enstm HRP el ALP) tillsätts, binder primär antikropp 8. Inkubering 9. Tvätt 10. Substrat binder till enzym (HRP el ALP) Färgomslag= sekundär antikropp har bundit primär = positiv detektion 11. spektrofotometrisk avläsning

Answer 38

10 ul av serum och 990 ul av buffertlösning

Answer 39

1. Platta coatas med antikroppar mot humant immunoglobin 2. Lymfocytsuspension från blod (okänt antal antikroppsproducerande celler) tillsätts brunnarna 3. Inkubering: antikroppsproducerande celler kommer bilda antikroppar 4. Antikroppar binder till antikroppar i brunnen i en zon runt cellerna. 5. Zon av antikroppar= SPOTS visualiseras genom tillsatts av enzymkonjugerade antikroppar mot IgG, IgA, IgM och adekvat substrat. 6. SPOTS räknas i plattmikroskop

Answer 40

**ELITSPOT** 1. antihuman, immunoglobulin 2. Antikroppsbindande IgG, IgA, IgM 3. Getantihuman IgG, IgA, IgM 4. ALP konjugerat extravidin 5. Substrat BCIP/NBT 6. Räkna spots **ELIZA** 1. Virus antigen ex HSV 2. IgG antikropp mot vius 3. Antihuman IgG konjugerad med ALP 4. Substrat PNPP låst i DEA-buffert 5. Absorbans avläses

Answer 41

kolla cellfunktion och cytokinproduktion

Answer 42

Eftersom indolspot test kan påvisa tryptofan nedbrytning **krävs de att bakterien har växt på agarplatta innehållande tryptofan**

Answer 43

* hängande droppen teknik * motilitetsrör

Labbhandledning Flashcards

(73 cards)