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cours 4 Flashcards

(89 cards)

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1
Q

combien de type de pression pour chaque ions (nomme les)

A

2, pression de concentration et électrostatique

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2
Q

pour K, Na et Cl-

les deux pression s’opposent ou vont dans meme sens?

au final vers l’extérieur ou interieur

A

Na dans meme sens

K et CL, opposé

K vers l’exterieur

CL et NA vers l’intérieur

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3
Q

pour le K : gradient de concentration va vers l’extérieur ou l’intérieur? électrostatique?

A

concentration pression va vers l’exterieur (plus concentré dedans)

electro vers l’intérieur (charge - dedans l’attire)

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4
Q

Le potentiel de repos ≈ potentiel d’équilibre du __

valeur estimé?

A

K (car membrane est surtout perméable au K au repos)

potentiel de repos environ -70mV, K environ -75mV

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5
Q

potentiel d’équilibre K vs Na vs Cl

A

K = -75 mV
Na = +55mV
Cl- = -60 mV

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6
Q

existe til du Ca libre ?
potentiel de repos ?

A

oui, potentiel de repos est +100mV

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7
Q

La génération d’un PPSE (3 étapes)

A

impulsion présynaptique, libération nt

nt se lie aux canaux ioniques en post, Na entre et membrane se Dépolarise

changement résultat du potentiel de membrane est le PPSE

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8
Q

La génération d’un PPSI (potentiel postsynaptique
inhibiteur) (3 étapes)

A

impulsion présynaptique, libération nt

nt se lie aux canaux ioniques en post, Cl- entre et membrane se hyperpolarise

changement résultat du potentiel de membrane est le PPSI

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9
Q

potentiel d’action expliqué vite faite

A

dendrite recoit signal, Si la dépolarisation atteint le seuil dans la zone
gâchette (trigger zone) → un potentiel d’action est
déclenché.

tout ou rien

se propage sans perte le long de l’axone avec myeline et canaux NAk

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10
Q

image quel canaux s’ouvre selon potentiel d’action (aussi le top)

A
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11
Q

pré-amplificateur =

A

Headstage

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12
Q

perfusion de la chambre d’enregistrement avec quoi

exemple

A

une solution
isotonique d’électrolytes

ex: ACSF (artificiel cerebrospinal Fluid) = solution cérébro-spinale artificielle

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13
Q

VF ACSF maintient uniquement l’équilibre ionique, mais pas le pH

A

F, les deux

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14
Q

on fait quoi a la solution pour garder les neurones viables?

A

oxygenation continuelle

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15
Q

autre role de la perfusion

A

assure un flux constant → évite l’accumulation de
déchets et stabilise les conditions d’enregistrement.

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16
Q

Les électrodes de verre sont remplies avec quoi

A

la solution isotonique
d’électrolytes

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17
Q

enregistrement intra vs extra vs patchclamp : quel solution dans électrode de vitre pour chaque

A

intracellulaire (électrode Sharp) : KCL ou K-acétate

extracellulaire : NaCL ou ACSF

patch clamp : solution intracellulaire (enregistrement whole cell)

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18
Q

l’étireur sert a quoi

A

fait les microélectrodes pour enregistrement intra et extra en chauffant et étirant les capillaires de verre produisant des pointes très fines ( moins de 1 um)

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19
Q

A quoi sert l’électrode de stimulation

A

appliquer un courant électrique contrôlé pour induire une réponse (PA, contraction)

tester la réactivité des neurones ou du circuit

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20
Q

comment est fait l’électrode de stimulation

A

2 pointes conductrices exposées, séparées par une mini distance

le reste est isolée pour pas que le courant passe au niveau des pointes

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21
Q

premier niveau de détection de signal

A

préamplificateur

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22
Q

qui transmet le signal vers l’amplificateur

A

préamplificateur

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23
Q

Deux électrodes sont au moins nécessaires pour tout enregistrement électrophysiologique

pourquoi

A

électrode d’enregistrement

électrode de référence

car une mesure électrophysiologique
est une comparaison.

important pour la précision et l’amélioration du signal.

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24
Q

ou est placée l’électrode de référence

A

a l’extérieur de la cellule d’intérêt

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25
les deux électrodes doivent etre a 0mV au début
NON, doivent juste etre au meme signal
26
pipette de verre enregistre quoi?
rien , fait juste garder solution
27
si pipette de verre enregistre rien, comment on enregistre
avec un fil d'électrode en argent qui passe dedans et baisse dans la solution
28
comment fil électrode est relié au courant
Le fil d’enregistrement passe par le joint et touche au contact électrique, qui est lié au pré-amplificateur. Un continuum du courant électrique est créé
29
qui controlle et positionne l'électrode dans le neurone
le microdrive pour éliminer les vibrations et permet de faire micro mouvement PAS notre main
30
microdrive vs micromanipulateur
Le micromanipulateur(ordi) contrôle le microdrive(le truc)
31
micromanipulateur permet mouvement en X,Y?
X,Y,Z
32
amplificateur sert a quoi
amplifie le signal du préamplificateur. En plus, il exécute les changements imposés par l'expérimentateur.
33
le signal analogique de l’amplificateur est digitalisé pour l’ordinateur par cet objet
interface analogue-digitale
34
le stimulation isolation unit sert a quoi et fonctionne comment
une unité électriquement isolée (pour que ampli stimule électrode de stimulation) tu pp prendre electricité de la plug car trop de bruits (courant alternatif) comment : possible grâce à la décharge d'une batterie.
35
Oscilloscope c'est quoi
il affiche le signal provenant de l'amplificateur ordi de nos jours
36
microscope sert a quoi
nécessaire pour placer l'électrode de stimulation et la microélectrode
37
quel grossissement(microscope) pour extracellulaire, intracellulaire et patch clamp
extra : faible intra et patch clamp : fort
38
a quoi servent les ordis
d'écrire des programmes de stimulation, d'enregistrer les réponses des neurones et d'analyser les données acquises.
39
a quoi sert la cage de faraday
La cage isole le poste d’électrophysiologie contre le bruit électrique de l'extérieur ( genre camion, phone)
40
permet le placement des électrodes sans interférence avec les vibrations
Table anti-vibrations (air table) lourde et repose sur air sous pression
41
VF Les objets miraculeux et les offrandes sont communs en laboratoire
V
42
les trois différentes préparations in vitro
Systèmes d'expression hétérologue Cellules primaires isolées Tranches de cerveau
43
systèmes d'expression hétérologue, c'est quoi le concept
des cellules non neuronales , mais on fait exprimé composante systeme nerveux genre pompe nak Cellules faciles à transfecter pour faire exprimer la protéine d’intérêt (par exemple un canal ionique)
44
systèmes d'expression hétérologue : protéine est exprimée normalement de manière endogène
Faux
45
probleme systèmes d'expression hétérologue
La machinerie cellulaire pour le transport membranaire, l’assemblage des protéines et les modifications post- transcriptionnelles pourraient être absents.
46
exemples systèmes d'expression hétérologue
47
Enregistrement in vitro: cellules primaires isolées , concept
Les cultures de neurones dissociés à partir d'une région d'intérêt ou on peut étudier les protéines d'une facon endogène
48
avantage et désavantage cellules primaires isolées
Très bonne visibilité de la cellule pour patch-clamp mais, Ces cellules forment des connexions synaptiques en culture. Cela ne représente pas des connexions neuronales normales dans un circuit.
49
3 avantages de enregistrement in vitro tranches de cerveau
plus facile que in vivo car tissu bouge pas Le rôle des neurones dans un circuit peut être étudié. Les cultures à long terme permettent l'expression de protéines ectopiques (pas censé etre la)
50
3 désavantage enregistrement in vitro tranches de cerveau
* Visibilité moins bonne qu’avec des cultures isolées primaires. * Les substances pharmacologiques ajoutées au bain doivent pénétrer dans le tissu. * La connectivité synaptique pourrait changer dans les cultures à long terme.
51
Les trois types de techniques d’électrophysiologie
Enregistrement extracellulaire Enregistrement intracellulaire Patch-clamp
52
meme diametre de pipette pour les trois types de techniques d’électrophysiologie?
non
53
Les enregistrements extracellulaires mesurent quoi
les différences de potentiel sur la surface extérieure d’un neurone actif (la différence de potentiel entre le bout de la microélectrode et l’électrode de référence).
54
enregistrement extracellulaire peut record une cellule ?
non, la réponse synaptique de nombreux neurones produit des potentiels de champ local mesurables. Les potentiels de champ locaux = la somme de l'activité synaptique de nombreux neurones.
55
enregistrement extracellulaire avantage et désavantage
avantage : facile a faire désavantage : impossible de mesurer des événements sous le seuil (sub-threshold) d'une seule cellule ( si cellule trop faible, elle se fait noyer par les autres)
56
Types des électrodes des enregistrement extra
Seulement une microélectrode extracellulaire ou plusieurs groupements d'électrodes
57
courbe du PA de l'enregistrement extra vs intra
a l'envers, 0 est pas le meme
58
que represente A et C le temps entre les deux?
a : ouverture canaux en pré C : ouverture canaux en post donc temps entre les deux est le temps que prend nt pour se rendre en post
59
exemple comprend pa trop
60
dans quel enregistrement la microelectrode empale le neurone (Sharp électrode)
intra
61
avantage enregistrement intra par rapport a extra
plus riche en terme d'info que extra car on voit plus petit changement
62
avantage et désavantages généraux de l'enregistrement intra
**Avantages** Échange minimale de la solution de la pipette avec le cytoplasme. **Désavantages** Difficile à réaliser avec les petits neurones. Enregistrement en voltage imposé impossible (on a besoin de deux électrodes).
63
enregistrements de façon cellules entières avec la technique de patch-clamp vs enregistrement intra
patch clamp juste meilleur intra pour les uncs
64
patch clamp comment on fait en general au debut
micropipette approchée de la membrane plasmique du neurone légère succion entre membrane et pipette (contact très étroit) isolation électrique du morceau de membrane sous la pointe de la pipette
65
5 différentes configuration en patch-clamp
Pipette attachée à la cellule (cell attached configuration) Extérieur-extérieur (outside-out configuration) Cellule entière (whole-cell configuration) Intérieur-extérieur (inside-out configuration) Le patch perforé
66
patch clamp (cell attached) permet quoi
La pipette est vraiment attachée à la cellule, via la succion. Possibilité d’enregistrer des courants du canal ionique dans la pipette
67
après cell attached on a 2 possibilité si on tire et enlève un bout de membrane explique les 2 possibilités
Inside-out = la partie du canal qui était dans la cellule est maintenant à l’extérieur, dans le bain. Whole-cell = il y a un continuum entre la solution de la pipette et celle dans le neurone.
68
cell attached utile pour connaitre valeur du potentiel de membrane (VF)
F, ne le permet PAS
69
avec whole cell mode, il est possible d'arriver a un autre mode. lequel
Si on est en whole-cell mode, il est aussi possible de retirer la pipette pour passer en mode outside-out.
70
pourquoi la membrane se recolle en outside out
hydrophobe
71
ce qui était à l’extérieur reste à l’extérieur.
Outside-out dans pipette liquide intra c’est le nouvea intra
72
comment faire patch perforé
La solution de la pipette contient un produit chimique qui provoque de petites perforations dans la membrane. Cela permet petite conductance ionique mais PAS de fuite du cytoplasme. faut etre en whole cell avant
73
outside out vs inside out. différence de ce qu'on peut faire avec les deux
outside-out :Donc, on peut changer rapidement le milieu extracellulaire avec un système de fast-step perfusion. inside out : vu que milieu intra est dans le bain, on peut changer rapidement le milieu « intracellulaire » avec un système de fast-step perfusion. note qu'Il est impossible de changer le milieu dans la pipette (pas de raccourci)
74
avantages et désavantages patch clamp cell attached
avantages : easy, milieu intra reste intact, peut mesurer un seul canal désavantages : controle par intra, valeur du potentiel de membrane inconnue
75
avantages et désavantages configuration whole cell patch clamp
avantages : Enregistrement du voltage imposé (ensemble des canaux sont enregistré) Échange entre le cytoplasme et la solution de la pipette: certain contrôle de la composition du milieu intracellulaire désavantages : Échange entre le cytoplasme et la solution de la pipette: la perte de constituants intracellulaires (wash-out)
76
VF : whole cell : (le contrôle du potentiel de membrane est mauvais en raison de la "grande" ouverture de la pipette
non, le contrôle du potentiel de membrane est excellent en raison de la "grande" ouverture de la pipette
77
Règle lorsqu’on fait du whole-cell (convention)
un courant positif entrant dans le neurone est toujours tracé vers le bas
78
whole cell: À -60mV, les ions sodiques vont entrer dans la cellule, donc courbe vers______ À +40mV, les ions potassiques vont sortir de la cellule, donc courbe vers ______
bas haut
79
questions pouvant etre adressés par différentes techniques, bof...
80
comment commencer une procédure patch clamp jusqua mise au point a 0 mV
remplir une pipette avec solution intra début perfusion de la chambre d'enregistrement avec de l'ASCF (important temperature constante de ACSF) mettre la tranche dans chambre d'enregistrement placez vos électrodes de stimulation placez pipette d'enregistrement dans le ACSF dans la chambre d'enregistrement appliquer pression positive et verifier pas de bulle d'air dans pipette mise au point a 0 mV
81
comment le systeme calcule la résistance de l'électrode d'enregistrement
Le système impose une impulsion voltage rectangulaire pour calculer la résistance de l'électrode d'enregistrement.
82
mise au point 0 mV done, que faire avec patch clamp pour finir
approcher tissu (pression positive) et positionner électrode a cote du neurone approcher membrane et regarder pour formation d'une fossette relacher pression et appliquer un peu de succion vérifier le joint giga-Ohm Si l’on fait un whole-cell patch-clamp, il y a rupture de la membrane. On vérifie que tous les paramètres sont bons. mnt on peut mesurer réponse durant stimulation yay
83
2 paramètres importants en patch clamp
Rm = résistance de la membrane = résistance de toute la cellule Ra = résistance de l’axe = résistance à la pipette
84
Si des fragments membranaires bloquent la pipette, effet sur Ra
le Ra augmente.
85
Il est important d’observer le ratio de Rm/Ra. Règle d’or, on veut un ratio d’environ_____
10 Par exemple: 107,4/11,3 = 9,5
86
ratio de 10 Rm/ra, ca veut dire quoi
Ce qui veut dire qu’on a un bon accès au milieu intracellulaire avec notre pipette.
87
on apprend quoi du graphique courant/voltage si il est linéaire?
voltage quand le courant est 0 nous dit le potentiel d'équilibre, donc canal dépedant de quel ion si c'est linéaire, canal non dépendant du voltage exemple ici on sait c'est sodium car +55 a 0
88
courbe de NMDA avec et sans magnesium dans le bain lequel est voltage dépendant, lequel non
Sans magnésium = courbe non dépendante du voltage Avec magnésium = courbe voltage-dépendant magnesium bloque canal NMDA jussqua un certain voltage
89
On bloque les canaux sodiques avec du TTX dans le bain. En bloquant les canaux sodiques, on bloque les potentiels d’action. Malgré cela, il est possible d'enregistrer les événements miniatures spontanés (petites relâches de neurotransmetteurs) Les changements de fréquences sont indicatifs de changements _____________ Les changements d’amplitude sont indicatifs de changements _____________
Les changements de fréquences sont indicatifs de changements présynaptiques Les changements d’amplitude sont indicatifs de changements post- synaptiques
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