hemarna Flashcards

Question

Vyšetření krevní skupiny (AGLUTINOGENY) - PRINCIP

Answer 1

- Antigenní vlastnosti ABO erytrocytů se vyšetřují pomocí známých diagnostických sér anti-A, anti-B, anti-AB - Princip spočívá v reakci antigen – protilátka, kdy neznámý antigen (na krvince) vyšetřujeme pomocí známé protilátky (v diagnostickém séru)

Answer 2

* Diagnostická séra: anti-A anti-B anti-AB

Answer 3

- KREV pacienta (ze suché kapky děláme náplav)

Answer 4

1. Připravíme se aglutinační zkumavky - 3 zkumavky = označíme si je -AB, -B, -A a číslo vzorku - 1 obyčejnou zkumavku na náplav 2. Připravíme si náplav ERY - suchá kapka do zkumavky, promýt v nadbytku fyz.roztoku, 3000ot/3min 3X 3. Do každé připravené zkumavky kápneme 1 kapku příslušného diagnostického séra (dle označení) 4. Dále přidáme 1 kapku ERY 5. Zkumavky promícháme a centrifugujeme 2500ot/20s 6. Odečítáme výsledek makroskopicky, jemným pohybem ruky oddělíme aglutinát ode dna zkumavky Pokud vyjde skupina A nebo AB děláme vyšetření na podskupinu A1 a A2

Answer 5

- Stanovení procentuálního poměru mezi objemem erytrocytů, popř. i ostatních buněčných součástí krve a objemem plazmy

Answer 6

1. Kapilára se naplní krví do 4/5 celkové kapilární délky 2. Nenaplněný konec se utěsní tmelem nebo se zataví nad svíčkou 3. Kapiláry se vloží do centrifugy ve vasermanově zkumavce a kapiláru dáme do zkumavky zataveným koncem ven 4. Po centrifugaci se odečítá hodnota na speciálním měřítku (3000 ot/min) 3' * Kapiláry se do něj vloží tak, aby spodní hranice sloupce erytrocytů byla na 0 (na dolní rysce) * Horní hranice se vyrovná s ryskou na rameni posuvného měřítka * Kapilárou se posune, až se meniskus plazmy protne s ryskou na rameni posuvného měřítka * Hodnota se odečte na stupnici, převede se na setiny * Kapilárou se posunuje, až se meniskus plazmy dostane na 100

Answer 7

Ženy 0,35 – 0,45 (35% - 45%) Muži 0,40 – 0,54 (40% - 54%)

Answer 8

DEHYDRATACE

Answer 9

- Vlastnost Rh (D) - přítomnost antigenu D na erytrocytu prokazujeme pomocí známých - diagnostických sér anti - D. - Princip spočívá v reakci antigen – protilátka, kdy prokazujeme přítomnost nebo nepřítomnost antigenu D pomocí známé protilátky

Answer 10

* anti D IgM - (Anti D1) * anti D mix IgM+IgG- (anti D2) * Kontrolní reagencie Rh  negativní kontrola (NK)

Answer 11

KREV pacienta (3-5% náplav erytrocytů)

Answer 12

1) Připravíme si zkumavky - 3 zkumavky = Anti D / Anti D mix / NK 2) Do každé zkumavky dáme 1 kapku séra a 1 kapku vyšetřovaných ERY (náplav) 3) Zkumavky protřepeme a centrifujujeme 1min/1000ot 4) Odečítáme makroskopicky nejprve mírným nakloněním zkumavky, kdy u negativních výsledků stékají ERY jako pramínek po jejím dně - Aglutinát oddělíme ode dna zkumavky jemným pohybem - Negativní výsledky KONTROLUJEME V MIKROSKOPU !!!! Je-li výsledek vyšetření Rh negativní  je nutné provést vyšetření slabé formy Rh antigenu (Rh week)

Answer 13

- Ke každému souboru vyšetření se provádějí pozitivní a negativní kontroly ke každému - diagnostickému séru (anti -D1, artn-D2), použijí se typové krvinky s předem známým Rh faktorem. - Postup je stejný, jako u vyšetření neznámého vzorku - Kontroly se odečítají vždy jako první NEGATIVNÍ KONTROLA (NK) = musí dát vždy negativní výsledek - Používá se k detekci spontanní aglutinace, tj. k eliminaci falešně pozitivních výsledků - Dojde – li v tomto případě k aglutinaci vyšetřovaných erytrocytů = výsledek nelze interpretovat

Answer 14

- Numerická hodnota v mm se získá měřením vzdálenosti mezi nejnižším bodem povrchového menisku a horním okrajem sedimentu erytrocytů ve sloupci z nesrážlivé zředěné krve, která stála ve svisle postavené rource po dobu 60 minut - Tento empirický fenomén závisí na vzájemných vztazích proměnných (hladina hemoglobinu, věk, pohlaví, menstruačnícyklus nebo těhotenství u žen,užívané léky, teplota prostředí apod.) - Sedimentace může probíhat při teplotách 4‘C, 20‘C a 37‘C.

Answer 15

1. Krví se naplní čistá, suchá, standardní sedimentační rourka po značku 0 2. Pak se rourka postaví do příčně svislé polohy v pokojové teplotě (18-25 "C) bez vystavení přímému slunečnímu světlu, vibracím a prúvanu 3. Odečítáme po 1h a po 2h - Po uplynuti 60 minut se odečítá vzdálenost v mm od dolního pólu povrchového menisku k vrcholu sloupce sedimentovaných erytrocytů (Vrstva bílých krvinek se nepočítá) - Udává se v mm/hod. jako hodnota sedimentace erytrocytů (SE nebo FW FW podle Fahraeuse a Westergrena ).

Answer 16

ZA 1 HODINU = MUŽI 3-9 mm ŽENY 7-12 mm ZA 2 HODINY = MUŽI 6-20 mm ŽENY 14 - 28 mm

Answer 17

Bakterie, viry, chronické záněty, poškození jater, chudokrevnost, nádorová onemocnění. Důležitý je také věk (nad 60 let se mohou objevit zvýšené hodnoty až do 30 milimetrů za hodinu, aniž by byl člověk nemocen)

Answer 18

přítomnost zánětu v těle. zvýšená hladina fibrinogenu v krvi. zvýšená hladina hematokritu v krvi

Answer 19

- Erytrocytární antigeny C, c, E, e se vyšetřují pomocí diagnostických sér obsahujících známou protilátku anti-C, anti-c, anti-E, anti-e - Princip spočívá v reakci antigen – protilátka, kdy neznámý antigen (na krvince) vyšetřujeme pomocí známé protilátky (v diagnostickém séru)

Answer 20

* Testovací séra: Anti – C Anti – c Anti – E Anti – e

Answer 21

1. Připravíme si náplav ERY (3-5% suspenze ERY) 2. Připravíme si zkumavky - 4 zkumavky popsaných dle antisér (anti C, anti c, anti E, anti e) - Kontroly (2x = pozitivní a negativní) 3. Do každé zkumavky dáme 1 kapku séra a 1 kapku vyšetřovaných ERY 4. Dobře promícháme a dáme centrifugovat (2500ot/20s) 5. Odečítáme makroskopicky jemným poklepem na dno zkumavky - Jako první se odečítají kontroly - V PŘÍPADĚ NEGATIVNÍHO VÝSLEDKY INKUBUJEME 10 – 20min PŘI POKOJOVÉ TEPLOTĚ, ZNOVU CENTRIFUJUJEME A MAKROSKOPICKY ODEČÍTÁME

Answer 22

HTC . 10 (3) / RBC

Answer 23

- Slabě vyjádřená vlastnost D se vyšetří pomocí nepřímého antiglobulinového testu diagnostickým sérem anti D-duo - Princip spočívá v reakci antigen – protilátka, kdy se v tomto případě jedná o slabou formu antigenu a proto je třeba umožnit navázání pratilátky na tento antigen pomocí inkubace (dochází k senzibilizaci erytrocytů) a následně je třeba reakci zviditelnit pomocí antiglobulinového séra

Answer 24

* Diagnostické sérum anti-D MlX * sérum AGH * pozitivní a negativní kontrolní erytrocyty * Checkcells CCC (senzibilizované kontrolní erytrocyty pro Coombsovy testy)

Answer 25

- Vyšetřovaný vzorek (3-5% náplav erytrocytů)

Answer 26

1. Připravíme si náplav ERY (3000ot/3minuty 3x) 2. Připravíme si zkumavky - 1 zkumavku = anti D mix - 1 zkumavku na náplav - 2 zkumavky = kontroly (pozitivní a negativní) 3. Do každé zkumavky kápneme 1 kapku diagnostického séra a přidáme 1 kapku náplavu vyšetřovaných ERY 4. Promícháme a inkubujeme 15 minut při 37 C 5. Promyjeme v nadbytku FR (3-5x)  3000ot/3min 6. Přidáme 2 kapky séra AGH a řádně promícháme 7. Centrifugujeme 2500ot/20s 8. Odečítáme makroskopicky mírným houpáním zkumavky KE VŠEM NEGATIVNÍM VÝSLEDKŮM PŘIDÁME 1 KAPKU CHECHCELLS, PROMÍCHÁME A CENTRIFUGUJEME 1MIN/2000OT  VÝSLEDEK MUSÍ BÝT VŽDY POZITIVNÍ

Answer 27

- Spočívá v mikroskopickém vyšetření krvinek a dalších složek krve získaných z tenkého krevního nátěru. Tento diagnostický postup umožňuje lékařům a laborantům získat informace o složení krve a identifikovat různé abnormality nebo patologie. - Principem je zhotovení jednovrstvého filmu buněk na podložním sklíčku určeno k mikroskopovaní

Answer 28

- Pomocí nepřímého antigtobulinového testu prokazujeme v séru přítomnost (nebo nepřítomnost) volné inkompletní protilátky

Answer 29

* Panoscreen – screeningové krvinky R1 + R2 (dvě lahvičky), nebo R1 R2 (jedna lahvička} * AGH sérum * Checkcells

Answer 30

- SÉRUM pacienta

Answer 31

1. Připravíme si zkumavky - 2 zkumavky = R1 a R2 2. Do každé zkumavky dáme 2 kapky vyšetřovaného séra a 1 kapku R1/R2 3. Promícháme a necháme 1 hodinu inkubovat v termostatu (1 hod/37 stupňů) 4. Poté hodnotíme přítomnost hemolýzy v supernatanu, poté zkusíme jemně protřepat zda není viditelná anglutinace (I MIKROSKOPICKY) = u kompletních prl. je pozitivní) 5. Když nic nevidíme = promyjeme obsah zkumavek 3-5x v nadbytku FR 6. Přidáme 2 kapky AGH, promícháme a centrifugujeme 1000ot/1min 7. Výsledky hodnotíme makroskopicky, všechny NEGATIVNÍ I MIKROSKOPICKY SPRÁVNOST VŠECH NEGATIVNÍCH VÝSLEDKŮ KONTROLUJEME PŘIDÁNÍM 1 KAPKY SENZIBILIZOVANÝCH KRVINEK CHECKCELLS - Promícháme a centrifugujeme 1min/2000ot - Výsledek musí být vždy POZITIVNÍ = aglutinace - V opačném případě je test neplatný́ a vyšetření se musí opakovat

Answer 32

- Pomocí enzymatického testu dokazujeme v séru přítomnost (nebo nepřítomnost) volné inkompletní protilátky - Jde o reakci antigen – protilátka

Answer 33

* Panoscreen – screeningové krvinky R1+R2 (dvě lahvičky), nebo R1 R2 (jedna lahvička) * Bromelin

Answer 34

- SÉRUM pacienta

Answer 35

1. Připravíme si zkumavky - 2 zkumavky  R1 a R2 2. Do zkumavek přidáme 2 kapky vyšetřovaného séra a 2 kapky screeningových krvinek a 1 kapku bromelinu 3. Zkumavky promícháme a necháme inkubovat 15 – 20 min při pokojové teplotě 4. Centrifugujeme 1min/1000ot 5. Hodnotíme přítomnost hemolýzy v supernatanu, poté jemně prostřepeme a hodnotíme přítomnost aglutinace makroskopicky (I MIKROSKOPICKY)

Answer 36

- Souprava obsahuje roztoky k rychlému barvení krevních nátěrů. Výsledné vybarvení má panoptický charakter. Barvení se provádí ponořováním do barvících roztoků. Intenzivita a odstín vybervení se dá podle potřeby snadno měnit počtem ponoření.

Answer 37

1. Fixace v methanolu (5 x 1s) 2. Kyselé barvení v Eosinu Y (3 x 1s) 3. Zásadité barvení v Azuru II (6 x 1s) 4. Opláchnutí ve stabilizačním pufr (PBS) 5. Poté necháme usušit a hodnotíme

Answer 38

barvící souprava Leukodif (Pliva Lachema a.s.) - methanol - eosin - azur II - stabilizační pufr (PBS)

Answer 39

- Princip spočívá v reakci antigen – protilátka, kdy neznámý antigen (na krvince) vyšetřujeme pomocí známé protilátky (lektin) - Podskupiny A vyšetřujeme tehdy, když jsme při vyšetřování krevní skupiny zjistili krevní skupinu A nebo AB - Vyšetření podskupin se provádí pomocí diagnostických sér (lektinů) anti- A, anti- H

Answer 40

* Diagnostická séra (Lektiny): anti – A anti - H

Answer 41

- KREV pacienta (náplav)

Answer 42

1. Připravíme si náplav ERY 2. Připravíme si zkumavky - 2 zkumavky (A1 a H + číslo vzorku) - Kontroly (pozitivní a negativní) 3. Do každé zkumavky dáme 1 kapku diagnostického séra a 1 kapku vyšetřovaných ERY (u kontrol typových krvinek) 4. Zkumavky promícháme a centrifugujeme 1000ot/1min 5. Aglutinát oddělíme ode dna jemným poklepem na její dno 6. Odečítáme makroskopicky

Answer 43

- Pomocí sady suspenzí erytrocytů s předem známými antigeny identifikujeme v séru prostřednictvím antiglobulinového a enzymatického testu konkrétní protilátku - Reakce antigen - protilátka

Answer 44

* Panocell (= makropanel typové panelové krvinky s 10 - 16 lahvičkami obsahujícími erytrocytární suspenzi s erytrocyty nesoucími předem známé antigeny) * Bromelin

Answer 45

- SÉRUM pacienta

Answer 46

1. Připravíme si zkumavky - 16 zkumavek a označíme si je (1-16) - 1 zkumavku na kontrolu 2. Do každé zkumavky kápneme 2 kapky vyšetřovaného séra, 2 kapky typových ERY a 1 kapku bromelinu - Do zkumavky na kontrolu = 2 kapky autologních ery a 1 kapku bromelinu 3. Zkumavky promícháme a inkubujeme 15 minut při pokojové teplotě 4. Zkumavky centrifugujeme 1min/1000ot 5. Odečítáme event. přítomnou hemolýzu (zaznamenáme do protokolu) a hledáme aglutinaci 6. Odečítáme MAKROSKOPICKY, VŠECHNY NEGATIVNÍ VÝSLEDKY MIKROSKOPICKY

Answer 47

- Principem je rozpočet jednotlivých typu leukocytu na jednovrstvém, obarveném krevní nátěru pomoci mikroskopu

Answer 48

* Vezmeme si barvený krevní nátěr * Pozorujeme pod mikroskopem za použití imerzního objektivu při zvětšení 1000x (dáme imerzní olej) * Počítáme 100 leukocytů pro určení diferenciálu * Jednotlivé typy leukocytů zaznamenáváme pomocí leukomatu (ten po spočítání 100 buněk zapípá) * Poté jednotlivě projíždíme jednotlivé typy buněk napočítáné v leukomatu, které se nám ukážou v procentech

Answer 49

* Neutrofily – segmenty (NEU): 50–70 % * Neutrofily – tyče (BAND): do 5% * Eozinofily (EOS): 1–3% * Bazofily (BAS): 0–1% * Monocyty (MONO): 3–8% * Lymfocyty (LYMF): 24–40 %

Answer 50

- Spočívá v reakci antigen-protilátka, kdy se v tomto případě vyšetřuje aglutinační účinnost séra při jeho postupném ředění geometrickou řadou - Maximální zředění séra, při kterém ještě nastává aglutinace, vyjadřuje titr aglitininů (protilátky) příslušného séra - Patří k nejdůležitějším imunohematologickým vyšetřením, kdy se sérum vyšetřuje na množství přítomných aglutininů (protilátek) - Jedná se o kvantitativní vyšetření protilátky, které provádíme po její identifikaci.

Answer 51

- Panocell (makropanel, typové erytrocyty nesoucími předem známé antigeny) - event. i AGH, Checkcells / Bromelin

Answer 52

1. Připravíme si a označíme zkumavky - 10 zkumavek (1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256, 1:512, 1:1024) + číslo vzorku 2. Od zkumavky č.2 (1:4) napipetujeme do všech zkumavek pipetou 100ul fyziologického roztoku 3. Do zkumavky č.1 (1:2) a č.2 (1:4) napipetujeme 100ul vyšetřovaného séra 4. Od zkumavky č.2 (1:4) rozpipetujeme geometrickou řadou po 100ul 5. Poté napipetujeme 100ul typových ERY a promícháme = titr vyšetřujeme za stejných podmínek jako jsme identifikovaly protilátku ENZYMATICKY = 6. Zkumavky promícháme a inkubujeme 15 minut při pokojové teplotě 7. Zkumavky centrifugujeme 1min/1000ot 8. Odečítáme event. přítomnou hemolýzu (zaznamenáme do protokolu) a hledáme aglutinaci 9. Odečítáme MAKROSKOPICKY, VŠECHNY NEGATIVNÍ VÝSLEDKY MIKROSKOPICKY NAT = 1) Zkumavky promícháme a inkubujeme 20 min při pokojové teplotě 2) Centrifugujeme 1min/1000ot 3) Odečítáme event. přítomnou hemolýzu (zaznamenáme do protokolu) a hledáme aglutinaci, a když je zaznamenáme do protokolu a jemně roztřepeme 4) Zkumavky inkubujeme 1h, 37C 5) Odečítáme event. přítomnou hemolýzu (zaznamenáme do protokolu) a hledáme aglutinaci, a když je zaznamenáme do protokolu 6) Obsah všech zkumavek promyjeme 3x v nadbytku fyz.roztoku 7) Do každé zkumavky přidáme 2 kapky AGH a promícháme 8) Centrifugujeme 1min/1000ot 9) Vyhodnocujeme MAKROSKOPICKY, NEGATIVNÍ I MIKROSKOPICKY - Hodnotíme makroskopicky, negativní výsledky mikroskopicky - Zapisujeme do předem připravené tabulky, makroskopicky modře, mikroskopicky červeně. - Hodnota titru je identická s hodnotou ředění ve zkumavce, ve které byla ještě zachycena mikroskopická aglutinace na + - KONTROLUJEME V MIKROSKOPU Hodnotíme dle této tabulky: ++++ = aglutinace viditelná pouhým okem ve zkumavce, nebo hrubé shluky v nátěru na sklíčku +++ = velké shluky viditelné mikroskopicky (bez volných ery) ++ = smíšené aglutinační pole + = několik malých shluků aglutinovaných ery v zorném poli neg = žádná aglutinace, ery volně rozptýleny

Answer 53

- Retikulocyt je vývojové stádium erytrocytu. Jedná se o bezjadernou buňku kulovitého tvaru, která obsahuje zbytky některých buněčných organel. Retikulocyt postupně mění svůj tvar na bikonkávní, zbavuje se buněčných organel a tím dozrává v erytrocyt - Většina retikulocytů se nachází v červené kostní dřeni, periferní krev zdravého dospělého člověka obsahuje retikulocyty v množství 0,5–1,5 % z celkového počtu erytrocytů - Zvýšený počet retikulocytů v periferní krvi se označuje jako retikulocytóza, která se většinou objevuje při vystupňované erytropoeze.

Answer 54

- Zjištění výskytu mladých erytrocytů s retikulofilamenózní substancí - retikulocytů

Answer 55

- Roztok brilant-krezylové modři od firmy Labortechnik KABE

Answer 56

1. Příprava směsi krve s barvivem: - Do kepu s brilantkresylovou modří se nadávkuje 50 μ l fyziologického roztoku - Dobře se promísí a poté se přidá 50 μ l promísené plné nesrážlivé EDTA-krve - Vše se důkladně promíchá (netřepat!) 2. Inkubujeme za pokojové teploty 20 - 30minut Zhotovení nátěrů pro odečet retikulocytů: 1. Po uplynutí 20–30 minut se provede nátěr 2. Na podložní sklíčko se nanese kapka směsi krve s barvivem ze zkumavky a roztěrovou lopatkou (podložním sklíčkem) se zhotoví tenký nátěr (,,do ztracena") 3. Ponechá se volně oschnout na vzduchu (minimálně 10 minut) 4. Nátěr se hodnotí pod mikroskopem při 1000násobném zvětšení a to tak, že se pozoruje přibližně 10 zorných polí po 100 erytrocytech (tj. 1 000 erytrocytů) 5. Hodnotí se přítomnost zrn, klubek, event. Sítí 6. Výsledný počet retikulocytů se vyjadřuje jako početní zlomek na 1000 erytrocytů, tj. v procentech nebo v tisícinách. RETIKULOCYTY MUSÍME PROSVĚTLOVAT MIKROSKOPEM, ABYCHOM SE UJISTILI, ŽE JDE OPRAVDU O RETIKULOCYT = PŘI PROSVĚTLOVÁNÍ JADÉRKA NESVÍTÍ

Answer 57

* Výsledek se uvádí v tísícinách všech erytrocytů * NAJDU JICH 5 = 0,005 * Fyziologické hodnoty: 0,5 – 1,5 % nebo 0,005 - 0,015 (vyjádřeno v tisícinách)

Answer 58

- Pomocí nepříméha antiglobulinovéha a enzymatického testu hledáme v séru příjemce protilátky namířené proti antigenům na erytrocytech dárce.

Answer 59

* AGH * Bromelin * Checkcells

Answer 60

* Vzorek PŘIJEMCE (SÉRUM) * Vzorek DÁRCE (KRVINKY)

Answer 61

Příprava vzorků: * K vyšetření potřebujeme sérum příjemce a krvinky dárce * Krvinky dárce vytlačíme ze segmentu krevního vaku do předem řádně označené * Zkumavky číslem krevní konzervy a přiřazeným číslem laboratorního vyšetření * NÁSLEDUJE PROMYTÍ KRVINEK DÁRCE V NADBYTKU FR - 3X, CENTRIFUGACE 3 MIN/3000 OT * PO SLITÍ SUPERNATANTU DOŘEDÍME NA 5% NÁPLAV KRVINEK VE FR Provedení: 1. Připravíme si zkumavky - 1 vasermanovu na náplav - 2 aglutinační zkumavky: - První zkumavku označíme číslem konzervy a pořadovým číslem vyšetření a NAT - Druhou zkumavku označíme číslem konzervy a pořadovým číslem vyšetření a ET 2. Do první zkumavky (NAT) nakapeme 2 kapky séra příjemce a 1 kapku krvinek dárce - Inkubujeme 1 hodinu při 37 stupních - ODEČÍTÁME MAKROSKOPICKY - Všechny ERY musí být v zorném poli rozptýleny jednotlivě - Pokud se objeví drobné rulování přikápneme kapku FR a rulování musí zmizet - Musíme odečíst I V MIKROSKOPU * KDYŽ NENÍ PŘÍTOMNA AGLUTINACE = 3-5x promyjeme = přidáme 2 kapky AGH = hodnotíme MAKROSKOPICKY I MIKROSKOPICKY  NEGATIVNÍ VÝSLEDKY KONTROLUJEME POMOCÍ CHECHCELLS (1 KAPKA, 1MIN/2000ot = MUSÍ BÝT POZITIVNÍ) 3. Do druhé zkumavky (ET) nakapeme 2 kapky séra příjemce, 2 kapky krvinek dárce a 1 kapku bromelinu - Inkubujeme 15-20min při pokojové teplotě - Centrifugujeme 1min/1000ot - Odečítáme MIKROSKOPICKY I MAKROSKOPICKY !!!!VÝSLEDKY MUSÍ BÝT NEGATIVNÍ!!!

Answer 62

- V hypotonickém prostředí přijímají erytrocyty vodu z vnějšího prostředí - Po dosažení kritického objemu dojde k porušení buněčné membrány a uvolnění hemoglobinu do vnějšího prostředí

Answer 63

- 1% roztok NaCl (fyziologický roztok) - Destilovaná voda

Answer 64

- KREV pacienta

Answer 65

1. Do zkumavek se napipetujem po 1 ml jednotlivých roztoků (dle tabulky) 2. Jako pozitivní kontrola se použije destilovaná voda, jako negativní fyziologický roztok 3. Do všech zkumavek se přidá po 1 kapce vyšetřované krve 4. Zkumavky se přikryjí parafilmem, dobře se promíchají a inkubují při pokojové teplotě 15 minut 5. Pak se centrifuguje 1000 ot. / 5 min a odečítá se výsledek - VE ZKUMAVCE S FYZIOLOGICKÝM ROZTOKEM = nenastane hemolýza, krvinky tvoři souvislý sediment, ostře ohraničený od bezbarvého supernatanu - VE ZKUMAVCE S DESTILOVANOU VODOU = nastala kompletní hemolýza, ve zkumavce není žádný sediment erytrocytu, tekutina ve zkumavce je červená MINIMÁLNÍ OSMOTICKÁ REZISTENCE = Odečítáme počátek hemolýzy, VĚTŠÍ číslo, ta zkumavka, kde už nevidíme přímo sraženinu, ale ery už začínají hemolyzovat MAXIMÁLNÍ OSMOTICKÁ REZISTENCE  ta je udána tou koncentrací NaCl, v níž je červená barva roztoku shodná s červenou barvou zkumavky s destilovanou vodou, MENŠÍ číslo, je to ta zkumavka, kde už trochu na dně vidíme shluky KDYŽ SI NEJSME JISTÝ = UJIŠŤUJEME SE V MIKROSKOPU

Answer 66

MINIMÁLNÍ = 0,45 - 0,40% MAXIMÁLNÍ = 0,35 - 0,30%

Answer 67

- Krevní skupina v AB0 systému - Podskupina - Rh faktor - screening (enzymaticky a NAT) - Když POZITIVNÍ = - Identifikace protilátky

Answer 68

- Orientační metoda ke zjištění krvácivosti prováděná in vivo (na člověku přímo). - Testujeme funkci destiček, schopnost tvorby trombocytové zátky. - Provádí se při podezření na poruchy hemostázy

Answer 69

1. Pacient, který je vytemperovaný na teplotu místnosti, se posadí do vyšetřovacího křesla 2. Drobný aseptický vpich do ušního lalůčku (ev. bříška 4. prstu) pacienta 3. Měří se stopkami čas, za který přestane spontánní tvorba kapek krve (pořád otíráme/ťupkáme)

Answer 70

2–5 minut

Answer 71

dysfibrinogenémii, trombocytopenii, funkční poruchu trombocytů, von Willebrarrdovu chorobu, hemofilii, DIC

Answer 72

IM, některé hyperlipoproteinémie

Answer 73

- krevní skupina - pokud A nebo AB = podskupina A1 a A2 - Rh faktor - Rh antigeny = c,C,e,E antigeny a Ká antigeny

Answer 74

- Krevní skupina v AB0 systému = Když vejde skupina A či AB - Podskupina A1, A2 - Rh faktor - screening protilatek (enzymaticky a NAT) =Když vyjde POZITIVNÍ - Identifikace protilátek - titr protilátek

Answer 75

= Do dekalcifikované plazmy je přidán tkáňový tromboplastin a kalciové ionty =Tímto způsobem se aktivuje vnější a poté společná cesta. Měří se čas do vzniku prvního vlákna fibrinové sraženiny.

Answer 76

* Tromboplastin tkáňový=Tromboplastin DS * kalciový ionty (CaCl2) * Vzorek plazmy normální a pacientovy

Answer 77

1. Všechny reagencie vytemperujte na teplotu 37 o C 2. Do zkumavky si dáme 0,1m1 vyšetřované plazmy a přidáme 0,l ml tkáňového tromboplastinu a 0,1 ml kalciových intů 3. Ihned, když přidáme kalciové inty, spouštíme stopky a začínáme v lázni háčkovat. 4. Háčkujeme až do vzniku koagula. 5. Čas do vzniku koagula je Quickův čas 6. Porovnáme s fyziologickými hodnotami.

Answer 78

* INR komerční reagencie (Protime, která již kalcové inty obsahuje) * Vzorek plazmy normální a patologické (kontroly) * Vzorek pacienta * Pipety, cupy (KEPY) * Přístroj ECL 412

Answer 79

1. Zapneme přístroj a necháme vytemperovat na 37 o C (proběhne automaticky, doba je cca 20 minut v závislosti na teplotě v laboratoři, přístroj hlásí vytemperování) 2. Všechny reagencie vytemperujeme v přístroji v příslušných pozicích pro temperování (černé pozice pro cupy a velké pozice pro reagencie a vzorky) 3. Načteme kyvety z kódu na pytlíku 4. Zapneme tlačítka ANALYSIS, SCREENING TEST, vybereme metodu PT, a rozbalí se nám, kolik a čeho pipetujeme: * 50 μl vyšetřované plazmy (sample) * 50 μl komerční reagencie Protime 5. dáme OK 6. Zmáčkneme pracovní pozici, zeptá se nás, zda chceme měřit vzorek (sample) nebo kontrolu, dáme měření vzorku, rozbalí se nám klávesnice pro označení čísla vzorku 7. Označíme číslo vzorku např. 01, 02, …a enter 8. Zobrazí se ADD tube – vložíme prázdný vytemperovaný cup, rozbliká se červený rámeček – ADD sample 9. Napipetujeme vzorek – rozbliká se červený rámeček a začne běžet čas inkubace (120 sekund) 10. Ozve se signalizace k napipetování reagecie ADD Protime - napipetujeme komerční reagencii 11. Rozbliká se červený rámeček – přístroj zahájí měření (MESURE) 12. Systém měří čas až do ukončení procesu srážení, měření je automaticky ukončeno, jakmile je detekována sraženina. 13. Zobrazí se výsledek RESULT (v sekundách), výsledek se automaticky vytiskne a zapíše se do tabulky měření 14. Vyhodnotíme výsledek, porovnáme s fyziologickým rozmezím

Answer 80

12–15 s INR: 0,8–1,2 (80–120 %) (ratio)

Answer 81

(PT pacient / PT kontrola) isi (nadruhou)

Answer 82

Při zvýšené srážlivosti krve je INR nižší, při prodloužené srážlivosti (např. při léčbě antivitaminem K) se INR zvyšuje.

Answer 83

* fyziologicky u novorozenců – nedostatek faktoru VII * terapie Warfarinem nebo jiné stavy s hypovitaminózou K * terapie heparinem i.v. * těžká porucha jaterní proteosyntézy * konsumpční koagulopatie – DIC

Answer 84

* Hyperkoagulační stavy * Trombózy

Answer 85

- Toto vyšetření se využívá k hodnocení VNITŘNÍ CESTY hemokoagulace - Ve vzorku plazmy zahřáté na tělesnou teplotu po přidání komerční reagencie APTT a roztoku chloridu vápenatého dojde k rekalcifikaci vyšetřované plazmy a v přítomnosti reagenčního roztoku APTT ke vzniku fibrinového vlákna.

Answer 86

* APTT komerční reagencie * Roztok chloridu vápenatého CaCl2 * Vzorek plazmy normální a pacientovy

Answer 87

1. Všechny reagencie vytemperujte na teplotu 37C 2. Do zkumavky si dáme 100ul (0,1 ml) vyšetřované plazmy (vzorku) a přidáme 100ul (0,1 ml) ml APTT reagentu a 100ul (0,1 ml) ml roztoku CaCl2 3. Ihned, když přidáme roztok chloridu vápenatého, spouštíme stopky a začínáme v lázni háčkovat. 4. Háčkujeme až do vzniku koagula (hlen ve zkumavce) = můžeme i na chvíli vyndat, abychom ho viděli lépe 5. Čas do vzniku koagula je APTT čas 6. Porovnáme s fyziologickými hodnotami

Answer 88

* APTT komerční reagencie (Actime) * Vzorek plazmy normální a patologické (kontroly), vzorek pacienta * Roztok chloridu vápenatého CaCl2 * cupy * Přístroj ECL 412

Answer 89

1. Zapneme přístroj a necháme vytemperovat na 37C (proběhne automaticky, doba je cca 20 minut v závislosti na teplotě v laboratoři, přístroj hlásí vytemperování) 2. Všechny reagencie vytemperujeme v přístroji v příslušných pozicích pro temperování (černé pozice pro cupy a velké pozice pro reagencie a vzorky) 3. Načteme kyvety z kódu na pytlíku 4. Zapneme tlačítka ANALYSIS, SCREENING TEST, vybereme metodu APTT, a rozbalí se nám, kolik a čeho pipetujeme: * 50 μl APTT reagentu (actime) * 50 μl vyšetřované plazmy (sample) * 50 μl roztoku chloridu vápenatého CaCl2 5. dáme OK 6. Zmáčkneme pracovní pozici, zeptá se nás, zda chceme měřit vzorek (sample) nebo kontrolu, dáme měření vzorku, rozbalí se nám klávesnice pro označení čísla vzorku 7. Označíme číslo vzorku např. 01, 02, …a enter 8. Zobrazí se ADD tube – vložíme prázdný natemperovaný cup, rozbliká se červený rámeček – ADD Actime 9. Napipetujeme komerční reagencii, rozbliká se zelený rámeček ADD sample 10. Napipetujeme vzorek – rozbliká se červený rámeček a začne běžet čas inkubace (170 sekund), připravíme se k napipetování startéru (CaCl2) 11. Ozve se signalizace k napipetování startéru (CaCL2), máme na to jen 20 sekund, jinak je měření neplatné!!! 12. Napipetujeme startér a rozbliká se červený rámeček - přístroj zahájí měření (MESURE). Systém měří čas až do ukončení procesu srážení, měření je automaticky ukončeno, jakmile je detekována sraženina. 13. Zobrazí se výsledek RESULT (v sekundách), výsledek se automaticky vytiskne a zapíše se do tabulky měření 14. Vyhodnotíme výsledek, porovnáme s fyziologickým rozmezím

Answer 90

* 36-40 s * APTT ratio: 0,9–1,1 (80–110 %) (ratio) - Hodnota APTT-Ratio nad 3 je kritická! (odpovídá času pacienta kolem 90 sekund)

Answer 91

vrozené defekty koagulačních faktorů, užívání antikoagulanciií – léčba heparinem

Answer 92

hyperkoagulační stavy, trombotické komplikace

Answer 93

- Krevní skupina v AB0 systému - Podskupina A1, A2 - Rh faktor - Coombs přímý

Answer 94

- Senzibilizované erytrocyty (erytrocyty s navázanou protilátkou) jsou aglutinovány antiglobulínovým sérem - Tento test slouží k průkazu aloprotilátek a autoprotilátek navázaných na vyšetřované erytrocyty in vivo = v krevním oběhu (novorozenci, susp. AIHA)

Answer 95

* DIAGNOSTICKÉ SÉRUM AGH * SENZIBILIZOVANÉ KRVINKY CHECKCELLS

Answer 96

- KREV pacienta (NÁPLAV)

Answer 97

1) Označíme si: - aglutinační zkumavku (1) 2) dáme suchou kapku do zkumavky a 3x promyjeme v nadbytku fyz.roztoku (3000ot/3min) 3) Přidáme 2 kapky AGH 4) Zkumavku promícháme 5) Cetrifugujeme 2500ot/20s 6) Odečítáme výsledek MAKROSKOPICKY jemným poklepem na dno zkumavky - Správnost kontrolujeme přidáním 1 kapky Chechcells - promícháme a centrifugujeme 2000ot/1min = MUSÍ BÝT POZITIVNÍ, když není: = Špatně provedený test = Špatná funkce AGH * Vyšetření se opakuje!!!

Answer 98

- aglutiníny - titr - křížová zkouška - podskupiny - Rh faktor - screening - identifikace

Answer 99

- aglutinogeny - přímý coombs - c,C,e,E antigeny - Dweek

Answer 100

- checkcells

Answer 101

- osmotická rezistence

Answer 102

- náplav - promývání - hematokrit

Answer 103

-> 2 kapky séra pacienta, 1 kapka krvinek -> pak 2 kapky AGH kontrola: 1 kapka checkcells inkubace: 37C 1hodinu (u Dw inkubace jen 15min) po inkubaci (pokud není aglutinace) —> promýváme ⁃ Dweek, screening

Answer 104

-> 2 kapky séra, 2 kapky krvinek, 1 kapka bromelinu Inkubace: 15-20min pokojová teplota ⁃ screening, identifikace, titr

hemarna Flashcards

(134 cards)