Observation Microscopique

Question 1

Qu’elle est la limite de résolution de l’œil humain ?

Answer 1

100um = 0.1mm

Question 2

Qu’est ce qu’un Microscope Optique (limite de résolution, fonctionnement et composition) ?

Answer 2

Linite de résolution de 0,2um et grossissement de 2000
*Fonctionnement : Source de rayonnement interagit avec échantillon, retransmission rayon à travers optique de transmission, agrandissement de l’image puis image finale visible
*Composition :
1-Occulaire = image réelle
2-Objectif = objet non déformé
3-Préparation
4-Condensateur
5-Diaphragme
6-Source lumineuse
*Préparations FIXES

Question 3

Quelle est la différence entre Microscope Optique et Electronique ?

Answer 3

*Microscope Optique = PHOTONS
*Microscope Electronique = ELECTRONS

Question 4

Qu’elles sont les deux types de Microscopes Optiques ?

Answer 4

*Microscope Optique à Transmission = Photons transmis par la préparation
*Microscope Optique à Fluorescence = Photons émis par la préparation

Question 5

Quelles sont les deux types de Microscopes Optiques à Transmission ?

Answer 5

*Microscope à Fond Clair = Lumière Blanche émise par la lampe soustrait à la lumière absorbée, ne sert PAS pour les Cellules VIVANTES = Elles doivent êtres fixes et colorées
*Microscope Photonique à Transmission à Contraste de Phase = convertit la différence d’indice de réfraction en en différence de contraste, on PEUT observer des Cellules VIVANTES

Question 6

Quelle est la principe du Microscope Photonique à Fluorescence Conventionnelle ?

Answer 6

Molécules fluorescentes absorbent l’énergie lumineuse puis la restitue sous forme fluorescente
λ émission est supérieure à λ excitation

Question 7

Quelle est la composition d’un Microscope à Fluorescence Conventionnelle (deux lampes) ?

Answer 7

*Deux lampes :
-Une lampe classique = observation à fond clair
-Une lampe Polychromatique = émet lumière de plusieurs λ
*Filtres d’excitation et d’émission
*Miroir Dichroïque pour éliminer les lumières parasites

Question 8

Qu’est ce qu’un Fluorochrome et qu’elles peuvent être leurs origines ?

Answer 8

*Ce sont des Colorants Fluorescents
*Peuvent êtres d’origine :
-Naturel = Chlorophylle
-Colorant spécifique = DAPI et Iodure de propidium (marque l’ADN)
-Colorant non spécifique = TRITC; rhodamine; FITC; Fluorescéine
-Protéine de fusion = GFP
-Anticorps couplés à un fluorochrome

Question 9

Quelle est la couleur émise et transmise par le DAPI ?

Answer 9

Le DAPI émet du BLEU et absorbe du VIOLET

Question 10

Quelle est la couleur émise et transmise par FITC et Fluorescéine ?

Answer 10

FITC et Fluorescéine émettent du VERT et absorbent du BLEU

Question 11

Quelle est la couleur émise et transmise par TRITC; Rhodamine et Iodure de Propidium ?

Answer 11

Ils émettent du ROUGE et absorbent du VERT

Question 12

Que pouvons nous utiliser pour amélioré la résolution du Microscope Optique à Fluorescence Conventionnel ?

Answer 12

On peut utiliser le Microscope Photonique à Fluorescence Confocale = excitation point par point

Question 13

Quelles sont les deux sortes de Microscope Electronique ?

Answer 13

*Le Microscope Electronique à Transmission
*Le Microscope Electronique à Balayage

Question 14

Qu’est ce qu’un Microscope Electronique à Transmission (Fonctionnement, limite de résolution ect…) ?

Answer 14

*Electrons transmis sont dirigés par une lentilles pour donner:
-des Zones Claires = Electrons diffractés
-des Zones Sombres = Electrons qui n’atteignes pas l’écran
Limite de résolution = 0,3-0,5 nm avec un grossissement 1 000 000
*Permet d’observer l’ultrastructure et les détails intracellulaires

Question 15

Qu’est ce qu’un Microscope Electronique à Balayage (Fonctionnement, limite de résolution ect…) ?

Answer 15

*Image Indirecte = électrons réfléchis par la surface = Rayonnement secondaire
Limite de résolution = 10 nm avec un grossissement 20 000
*Permet d’observer les surfaces de la membrane et de de la cellule