PCR

Question 1

PCR

Answer 1

reacao de polimerização em cadeia, que se baseia na amplificação exponencial seletiva de uma quantidade reduzida de DNA de uma unica celula, sem o uso de um organismo.

Question 2

3 etapas do ciclo de PCR

Answer 2

desnaturação, anelamento e extensão

Question 3

desnaturacao

Answer 3

94-96 graus, ha a separacao da dupla cadeia de DNA

Question 4

anelamento

Answer 4

45-60 graus, há a ligacao de um primer a cada uma das cadeias

Question 5

extensão

Answer 5

72 graus, sao incorporados os nucleotidos complementares à sequencia alvo

Question 6

nested PCR

Answer 6

para melhorar a especifidade e a eficiência da reação, o segmento genómico é amplificado primeiro de forma abrangente e utiliza-se este produto para se amplificar a sequência alvo

Question 7

hot start

Answer 7

Começa por desnaturar um bocado do material genético antes de iniciar o PCR, a atividade da taq polimerase é inibida durante a preparação da reação para evitar a amplificação de produtos inespecificos.

Question 8

regras de primers para o pcr

Answer 8

• entre 15 e 25 nucleotidos
• não pode haver zonas autocomplementares
• um primer n pode ser complementar ao outro
• não ter A e T no inicio

Question 9

real time PCR

Answer 9

baseia se no uso e deteção de um oligonucleótido fluorescente, a quantidade de fluorescencia é proporcional à quantidade de produto de PCR após cada ciclo

Question 10

detetores do real time PCR

Answer 10

sonda e syber green