Chapitre 2

Question 1

Définition d’un artefact.

Answer 1

Fausse structure observée au microscope causée par la préparation de l’échantillon.

Question 2

Causes principales d’un artefact.

Answer 2

Les fixateurs chimiques comme le paraformaldehyde qui précipitent les protéines et créent l’illusion de structure.

Question 3

Comment éviter les artéfacts?

Answer 3

Préparer l’échantillon de différentes façon comme utiliser plusieurs fixateurs et comparer les résultats.

Question 4

Grossissement efficace vs stérile?

Answer 4

Efficace: Image agrandie montre des détails résolus par le microscope en fournissant de nouvelles informations.

Stérile: Image agrandie mais aucune nouvelle information.

Question 5

Définition de la limite de résolution.

Answer 5

Distance minimale entre deux points(centre à centre) pouvant être distingués comme entités séparées. C’est une expression quantitative de la capacité de grossissement efficace d’un appareil optique.

Question 6

Quelle est la limite de résolution de la microscopie optique?

Answer 6

200nm pour traditionnelle, 40nm pour super-résolution.

Question 7

Formule de la limite de résolution(d).

Answer 7

d = 0.61*lambda(longueur d’onde)/O.N = 0.61 * lambda / n(indice de réfraction du milieu) * sin(alpha(demi-angle d’ouverture du cône lumineux))

Question 8

Comment améliorer la microscopie photonique?

Answer 8

Diminuer la longueur d’onde(lumière bleue), utiliser les UV.

Question 9

Avantages et désavantages de la microscopie UV.

Answer 9

Avantage:
- Meilleure résolution(longueur d’onde plus courte)

Désavantages:
- Optique en quartz(difficile à travailler)
- Miroir à première surface
- Observation indirecte via tissus photosensibles

Question 10

Microscopie optique vs photonique?

Answer 10

Optique:
- Longueur d’onde 500nm
- Resolution 200nm
- Grossissement x1000 à x2000

MET:
- Longueur d’onde 0.004nm
- Resolution 0.1 à 0.25nm
- Grossissement x10_000 à x1_000_000

Question 11

Équation de la longueur d’onde en MET?

Answer 11

lambda = h(constante de Planck)/m(masse)*v(vitesse) = 1.23 / sqrt(V(Voltage appareil))

Question 12

Contraintes de la MET

Answer 12

• Faire le vide
• Préparations minces
• Cellules mortes
• Coût élevé

Question 13

Fonctionnement de la MET

Answer 13

1. Émission par chauffage d’une cathode(filament de tungstène)
2. Accélération par tension anode-cathode (Lentilles magnétiques pour focaliser le faisceau d’électrons)
3. Focalisation par condenseur magnétique
4. Traversée du spécimen par l’électron
5. Détection de l’électron par une plaque phosphorescente qui convertit en lumière

Question 14

Pièces d’un microscope électronique

Answer 14

• Canon à électrons
• Anode
• Objectif
• Bobines déflectrices (créent un champ magnétique contrôlé qui dévie le faisceau d’électrons dans la bonne direction)
• Objet
• Bobines déflectrices
• Plaque phosphorescente(ou caméra convertissante d’électrons en lumière)

Question 15

Les étapes de préparation des échantillons en micro. photonique.

Answer 15

1. Fixation: Formaldéhyde pour stabiliser les structures
2. Déshydratation: Bain d’alcool à concentration croissante
3. Préparation pour paraffine: bain de xylène ou toluène
4. Inclusion dans la paraffine: Bloc créé par solidification
5. Microtomie: Coupes à 10-20 µm.

Question 16

Quel est l’artefact commun des solvants avec les lipides?

Answer 16

Les toluène et xylène dissolvent les lipides neutres (triglycérides) des adipocytes, ce qui créer des cavités vides.

Question 17

Les étapes de préparation des échantillons en MET.

Answer 17

1. Fixation avec glutaraldehyde et tetroxyde d’osmium
2. Déshydratation: Alcool ou acétone
3. Remplacement: Oxyde de propylène(miscible avec résine)
4. inclusion: Résine époxy très dure
5. Polymérisation: Four pour durcir complètement
6. Ultramicrotomie: Couteau en diamant/verre pour environ 50 nm
7. Récupération: Sections sur grille de cuivre

Question 18

Étapes du cryodécapage.

Answer 18

1. Congélation dans azote liquide
2. Fracture avec microhache
3. Ouverture
4. Décapage: Sublimation pour accentuer le relief
5. Ombrage: Mélange de platine et de carbone
6. Réplique

Question 19

Nommer les techniques de coloration et contraste

Answer 19

• Imprégnation métallique
• Coloration négative
• Ombrage: Avec ou sans réplique
• Cytenzymologie
• Immunocytochimie
• Immunocytoenzymologie

Question 20

Définition de l’histochimie

Answer 20

Étude des raisons de la coloration.

Question 21

Avantages et désavantages de la coloration HE?

Answer 21

Avantage:
- Rapide
- Reproductible
- Peu couteux

Désavantage:
- Mécanisme de coloration incompris

Question 22

Le mécanisme de la microscopie à fluorescence.

Answer 22

1. Lumière de l’ampoule
2. Filtre excitateur pour obtenir uniquement la longueur d’onde voulue (bleue ou UV)
3. Diffraction dans le spécimen
4. Filtre d’arrêt pour arrêter le rayon initial(bleu ou UV)

Question 23

Mécanisme de l’immunofluorescence.

Answer 23

1. Association de fluorochrome à des anticorps
2. Anticorps vont se fixer

Question 24

Mécanisme de la cytoenzymologie.

Answer 24

1. Enzyme agit sur le substrat + colorant
2. Obtention d’un complexe coloré de produit 1 et 2

Question 25

Mécanisme de l'imprégnation métallique.

Answer 25

Dépôts de métaux lourds (Pb, W, Os, Au, Pt) sur les membranes.

Question 26

Mécanisme de la coloration négative.

Answer 26

Électron reçu par une solution de phosphotungstate. Ceux qui frappent le spécimen ne sont pas perçus.

Question 27

Peut-on réaliser de l'ombrage sur des coupes à l'ultramicrotome?

Answer 27

Non, l'ombrage ne peut que se faire sur des structures tridimensionelles.

Question 28

Mécanisme de la cytoenzymologie.

Answer 28

Coloration d'enzyme et observation de la réaction de la cellule e.g. Gomori avec lysosomes.

Question 29

Définition de l'immunocytochimie.

Answer 29

Couplage d'anticorps avec composé, puis observation de la réaction.

Question 30

Définition de l'immunocytoenzymologie.

Answer 30

Anticorps couplée à une enzyme, puis observation de la réaction.

Question 31

Expliquer le parcours de la lumière dans la microscopie à champ sombre.

Answer 31

1. Lumière est émise 2. Lumière est déviée par un diaphragme annulaire qui laisse passée la lumière en périphérie 3. Condenseur parabolique redirige les rayons 4. Rayons traverse le spécimen, et ne frappe pas l'objectif directement. 5. Lumière réfractée par le spécimen peut être observée

Question 32

Expliquer le parcours de la lumière dans la microscopie à contraste de phase.

Answer 32

1. Lumière est émise 2. Elle passe à travers un anneau de phase (comme microscopie à champ sombre) 3. La lumière déviée est redirigé vers le spécimen (X) 4. La lumière directe et réfractée du spécimen sont redirigées vers une plaque de phase, qui déphase la lumière réfractée par rapport à la lumière directe. 5. L'objectif reçoit les deux ondes

Question 33

Que permet la microscopie à champ sombre?

Answer 33

De renforcer le contraste dans les objets non-colorés

Question 34

Expliquer l'autoradiographie

Answer 34

1. Incubation de cellules avec isotope radioactif 2. Fixation(Déshydratation, paraffine, microtome) 3. Immersion de la lame dans une émulsion photographique liquide à base de sel d'argent(AgBr) 4. Exposition de durée moyenne à longue, au cours duquelle les rayonnements radioactifs des cellules irradient les ions Ag+ de l'émulsion qui se précipitent en métaux Ag. 5. L'interaction Ag+ rayon émet un rayonnement lumineux qui imprime sur la plaque photographique.

Question 35

Expliquer la microscopie électronique à balayage(MEB).

Answer 35

1. Un canon d'électrons émet 2. Les électrons traversent une anode. 3. Un dispositif de balayage contrôle l'orientation du rayon. 4. Le rayon traverse un objectif 5. Le spécimen est illuminé 6. Un récepteur d'électron capte le rayon et le transmet à un ordinateur.

Question 35

Quels sont les avantages de la MEB?

Answer 35

- Excellente résolution latérale - Excellente profondeur de champ

Question 36

Quelles sont les applications particulières de la MEB?

Answer 36

- Morphologie de surface - Topographie - Aspect 3D réaliste

Question 37

À quoi sert le fractionnement cellulaire?

Answer 37

À isoler et étudier séparemment les organelles et molécules cellulaires.

Question 38

Quelles sont les techniques principales du fractionnement cellulaire?

Answer 38

- Centrifugation différentielle - Centrifugation zonale

Question 39

Sur quoi est fondé théoriquement le fractionnement cellulaire?

Answer 39

Équation de Stokes qui permettent de décrire le comportement des particules en suspension centrifugée

Question 40

Nommé un problème commun de la centrifugation en milieu homogène.

Answer 40

La contamination du culot par les particules déjà présentes.

Question 41

Quels sont les quatres facteurs qui affecte la sédimentation?

Answer 41

- Taille - Densité - Densité milieu - Viscosité

Question 42

Comment est définie l'équation de Stokes?

Answer 42

dx/dt = (2r²(Dp-Dm)) * g /9η où g = (4π²rpm²)x/3600

Question 43

Comment est quantifié le facteur de sédimentation d'une particule?

Answer 43

S(Svedberg) -> dx/dt = sg (18S > 10S)

Question 44

Quel est le problème avec la formule de Stokes et quelle est la solution?

Answer 44

Problème: Les organelles ne sont pas parfaitement sphériques Solution: Ajouter des paramètres à l'équation -> s est une fonction de la taille + densité + Forme

Question 45

Qu'est ce que la centrifugation zonale?

Answer 45

Centrifugation avec un gradient de saccharose. Les particules descendent jusqu'à atteindre une densité égale au milieu (isodensité).

Question 46

Quels sont les avantages de la centrifugation zonale?

Answer 46

Avantage 1: Sépare les particules par la densité même si tailles similaires. Avantage 2: Moins de perturbation lors du chargement.

Question 47

Quelles sont les différences entre la centrifugation zonale et celle en gradient de densité?

Answer 47

La centrifugation en gradient de densité se base uniquement sur la densité. Elle utilise un gradient continu dense pour atteindre l'isodensité. C'est une technique longue et sophistiquée.