Quels sont les 2 isotopes utilisés pour marquer l’adn et quelle est leur demi-vie
P32, 14 jours
S35, 88 jours
Le dérivé des phosphate à incorporer pour que l’adn soit marqué avec le souffre se nomme…
dérivé phosphorothiate
quelles sont les deux méthodes les plus utilisées pour détecter l’adn marquée radioactivement?
- comptage à scintillation
2. Autoradiographie
Quelles sont les étapes du comptage à scintillation (plus ou moins)
- Utilisation de scitillants
- Détection des pulse de lumière par une cellule photoéletrique
- les échantillons radioactifs sont déposés dans des bouteilles avec liquide à scitillation
- Le compteur imprime les valeurs sur le nombre de pulse pour chaque échantillon
- La quantité relative d’adn peut être déterminée
Qu’est ce qu’un scintillant?
émission de pulse de lumière quand les électrons de hautes énergie sont relâchés par l’adn radioactif (Beta particules)
Comment peut on mesurer le taux de réplication de l’adn dans différentes souches bactériennes (étant une mesure de viabilité des cellules dans une population microbienne)
Le comptage à scintillation
En quoi l’autoradiographie peut être utile?
Pour détecter l’adn marquée radioactivement dans un gel après électrophorèse
Vrai ou Faux:
L’autoradiographie utilise le buvardage.
Vrai. en effet, le buvardage est utilisé pour transférer la bande sur gel sur une membrane, pour ensuite détecter l’adn radioactif attaché à un papier filtre
Mettre les étapes dans l’ordre (autoradiographie):
- Noircissement d’un film photographique
- l’adn est dans un gel, une membrane, un papier filtre
- l’exposition peut prendre des heures ou des semaines
- Film est exposé sur gel ou autre support avec adn marqué
- émission de beta-particule
- l’adn est dans un gel, une membrane, un papier filtre
- émission de beta-particule
- Noircissement d’un film photographique
- Film est exposé sur gel ou autre support avec adn marqué
- l’exposition peut prendre des heures ou des semaines
Quels sont les problèmes des radio-isotopes? (environ 3)
- Entreposage, manipulation, élimination
- beta particules sont toxiques (protection nécessaire)
- Autres méthodes existent, plus rapide et moins dispendieuse
Qu’est ce que la fluorescence?
La molécule absorbe de la lumière d’une longueur d’onde particulière et emet de la lumière à faible énergie à une longueur d’onde plus longue.
La fluorescence peut être utilisée avec
A) la cytométrie de flux
B) l’électrophorèse capillaire
Les 2!
Quels sont deux marqueurs moléculaires de l’adn qui se lie à l’uracile
la biotine et la digoxigénine
Quelles sont les étapes du marquage de l’adn à la digoxiénine ou la biotine (environ 4)
- dUTP marquée avec de la biotine/digo
- Incorporation de dUTP au lieu de thymidine
- Ajout d’avidine, qui lie la biotine. Biotine non disponible à la croissance bactérienne + Ac pour la digo
- Liaison de l’avidine et l’Ac à une enzyme qui peut générer des produits colorés ou chimiluminescence
Que fait la phosphatase alcaline?
Produit une couleur bleue lorsqu’elle coupe des liaisons P (substrat chromogénique X-Phos). Ou le substrat lumi-Phos en chimiluminescence.
Quel est l’avantage d’utiliser Edu au lieu de Brdu?
Edu est un analogue de la thymine et s’incorpore dans l’adn, il permet de visualiser la réplication dans la cellules.
Tandis que Brdu se lie à des Ac, trop gros pour accéder à l’adn db, il faut donc extraire l’adn et le dénaturer.
Vrai ou faux. L’adn sb absorbe plus d’UV que db
Yup
Que veut dire:
A) Melting
B) Annealing
A) dénaturation / fusion des brins d’adn
B) brins d’adn s’apparie de nouveau
Comment définir à quel point deux séquences sont similaire. Par exemple, les séquences de Ftz de e.coli et s.thyphimirium
Hydridation des brins d’adn sur un flitre.
Quelles sont les étapes d’une hydridation southern
- Digestion par enzyme de restriction
- Fragments séparés par électrophorèse
- Fragment dénaturés avec solution d’hydroxyde de Na
- ADN transféré par buvardage sur une membrane de nylon
- membrane trempée dans une solution contenant la sonde adn marquée
- Fixation de la sonde sur les section avec une forte homologie
- autoradiographie
En quoi consiste FISH et que permet-elle de détecter?
Hybridation de la séquence avec une sonde marquée fluorescente.
Détection de: gène, adn, arnm, à l’intérieur de la cellule
Comment peut-on évaluer la réplication complète du chromosome?
Sonde fluo à l’ori et ter
Le molecular beacon (balise moléculaire) contient combien de paires de bases?
environ 30 pb
