1
Q
Quel est le but de la biopathologie dans la pratique médicale?
A
- Élaborer un DIAGNOSTIC ou des hypothèses diagnostiques pouvant être clairement comprise par le clinicien.
- Préciser le PRONOSTIC d’une maladie en particulier en pathologie cancérologique.
- Mettre en évidence des marqueurs pouvant servir à la THERAPEUTIQUE du patient
- Evaluer l’effet des thérapies administrées (chimio/radiothérapie ou anti-inflammatoire pour éviter les rejets de greffes).
- Implication dans des protocoles de recherche
2
Q
Quels sont les deux types de prélèvements possibles ? et leur formes ?
A
- Prélèvements cytologiques, sont obtenus par FROTTIS ou raclage d’un organe. également par PONCTION, et CENTRIFUGATION d’un liquide cytologique recueillis.
- Prélèvements tissulaires :
BIOPSIES, PIÈCES OPÉRATOIRES ou par AUTOPSIE
3
Q
En quoi consiste la technique d’étalement des cellules sur lames?
A
- par frottis ou ponction d’un organe
- déposé sur le bord de lame
- étalé par clinicien
- on peut fixer ou non
- coloration
4
Q
Quels organes peuvent-être ponctionnés?
A
- ganglions lymphatiques/adénopathies
- thyroïde
- sein
sous repérage échographique
5
Q
En quoi consiste la technique de centrifugation d’un liquide récolté ou après ponction?
A
-liquide généralement trop volumineux pour être étalé
=> centrifugation
-placé dans tubes
-matériel centrifugé sur lame (culot-spot) généralement au centre
-coloré
6
Q
En quoi consiste la cytologie monocouche dite aussi cytologie en couche mince ou cytologie en milieu liquide?
A
-principe d’aspiration et filtration
-très utilisée dans détection du cancer du col utérin
après avoir frotté le col utérin avec une BROSSE, le matériel obtenu est placé dans un flacon de FIXATEUR ALCOOLIQUE numérotée avec les coordonnées de la patiente.
Un automate DISPERSE, FILTRE, ASPIRE et TRANSFERE le matériel sur une lame qui sera colorée et analysée.
le résiduel restant dans le flacon de fixateur
=> techniques complémentaires (recherche HPV)
7
Q
Quelle est l’avantage de la cytologie?
A
- Rapide
- Peu couteuse
- Moins invasif
- Intérêt pour le dépistage de masse en pathologie tumorale
- résultat fiable si interprété par un pathologiste averti
Par contre, la cytologie ne fournit que des renseignements partiels/incertains.
8
Q
Quel est le but de la biopsie ?
A
Faire le diagnostic de la maladie
9
Q
Quel est le but de la pièce opératoire ?
A
Faire le diagnostic de la maladie
*en pathologie cancéreuse: permet de donner des critères histo-pronostiques
10
Q
Quelles sont les différentes méthodes de prélèvements cytologiques
A
- Recueil des liquides spontanément émis: urines, expectorations, drain…
- Raclage, brossage, écouvillonnage de cellules desquamant spontanément : frottis col utérin, brossage des voies bililaires…
- Ponction à l’aiguille d’un liquide: épanchement de séreuse, articulaire, LCR, kyste, collection…
- Ponctions à l’aiguille d’un organe, d’une tumeur: thyroide,ganglions…
11
Q
Pourquoi l’examen cytologique ne fournit que des renseignements partiels voire incertains?
A
- Certaines anomalies cyto-nucléaires ne sont pas spécifiques
et sont difficilement distinguables entre celles des CANCERS ou celle d’un PROCESSUS INFLAMMATOIRE. - certaines atypies rencontrées dans l’inflammation peuvent mimer un cancer lors de l’examen cytologique
- Ne donne pas d’architecture tissulaire (on ne sait différencier un cancer in situ d’un invasif)
=> examen de dépistage et d’orientation
=> toujours confirmation histologique (contrôle par biopsie) avant tout tt agressif (chimiothérapie, Rx, Chirurgie)
12
Q
Quels sont les éléments qui conditionnent la qualité du diagnostic pathologique?
A
- Les pièces opératoires doivent parvenir rapidement au laboratoire dûment identifiées avec les renseignements cliniques adéquats.
- la FIXATION des pièces opératoires doit être RAPIDE et concomitamment si possible, un prélèvement CONGELÉ de la lésion sera effectué pour le mettre dans une bio-banque.
- L’examen MACRO doit être STANDARDISÉE et PRÉCIS
- Les techniques permettant la réalisation des COUPES doit être standardisée efficacement.
- un COMPTE RENDU doit être précis
13
Q
En quoi consiste l’encodage?
A
- chaque pièce arrive avec une FEUILLE DE DEMANDE avec coordonnées du patient et renseignements cliniques adéquats
- numéro individuel et code barre attribué au labo
*(faire le plus rapidement si la pièce n’est pas fixée pour éviter le phénomène d’auto-lyse).
14
Q
En quoi consiste l’examen macroscopique et fixation?
A
- pièces pesées, mesurées, orientées, leurs marges/berges de résection (limite d’exérèse) sont tatouées à l’encre de chine et découpées (tranchées)
- congelation
- pièce opératoire fixée le plus rapidement possible
- utilisation FORMOL à 10% tamponne à pH neutre ou légèrement alcalin
15
Q
Quelles sont les règles pour une bonne fixation ?
A
- avant fixation:
- Ouvrir les organes creux
- Trancher les oragnes pleins en fines tranches de 3 à 10 mm au max
- Insufflation de formol dans les poumons
- Os: scié, fixé au formol, décalcifié avant d’être prélevé
- Volume fixateur suffisant (10 fois le volume de la pièce)
- Fixation doit être longue (formol fixe au max 1mm d’épaisseur de tissu par heure
=> durée fixation minimale de 2 à 5h
=> 24/48h pour une pièce opératoire
*attention à la sous-fixation et sur-fixation
16
Q
Pourquoi utiliser de l’encre de chine?
A
- visualisation des berges d’exérèse
- fournit au chirurgien l’information que l’exérèse de la tumeur est complète ou non
17
Q
En quoi consiste la déshydratation et la mise en paraffine?
A
-coupes histologiques classiques sont obtenues à partir de bloc paraffinés
-tissus humains abondants en eau
-déshydratation
=> dans automates par passage des bains d’alcools de gradients (concentration) progressifs (70,95,100%)
-alcool éliminé par xylène(qui dissout aussi les graisses dont adipocytes optiquement vide)
-processus qui prend 6 à 12h
-échantillons sont inclus dans la paraffine à 56°C
18
Q
Comment se font les coupes et coloration de routine à l’hematoxyline/éosine?
A
- bloc découpé au microtome
- coupes mesurent 3 à 5 microns
- “ruban” de différents niveaux de coupes
- lame préalablement numérotée et vont être colorées
19
Q
De quelles natures sont des colorants utilisés?
A
- aqueux ou alcooliques
- pour dissoudre la paraffine
- réhydrater
20
Q
Quel est le colorant le plus couramment utilisé?
A
Hématoxyline-éosine
21
Q
Qu’est-ce que l’hématoxyline?
A
- couleur bleu/mauve
- colorant basique
- va se fixer sur composants naturellement acide de la cellule (ADN/ARN)
22
Q
Qu’est-ce que l’éosine?
A
- couleur rose/rouge
- colorant acide qui va se fixer sur les composants naturellement basique de la cellule et en particulier le cytoplasme qui est naturellement basique
23
Q
Quel est le but des techniques anatomopathologique “standard” ?
A
Transformer un fragment de tissu vivant en une lame interprétable au microscope, pouvant être conservée indéfiniment.
24
Q
En quoi la pathologie permet-elle de préciser le pronostic?
A
Le pathologiste apporte des éléments utiles du pronostic, en particulier dans le domaine de la pathologie tumorale
25
En quoi la pathologie permet-elle d'évaluer l'effet des traitements?
- Disparition des lésions
- Persistance des lésions
- Aggravation des lésions
26
Quels sont les différents liquides biologiques spontanément émis qui peuvent être recueillis pour des prélèvements cytologiques?
- Urine
- Expectoration
- Fistule
- Drain
27
Sur quels tissus/organes peut-on effectuer des prélèvements cytologiques par raclage, brossage, écouvillonage ou aspiration de cellules desquamant spontanément?
- Col utérin
- Bronches
- Voies biliaires
28
Sur quoi peut-on faire des prélèvements cytologiques par ponction à l'aiguille?
- Épanchement de séreuse
- Épanchement articulaire
- Liquide céphalo-rachidien
- Kyste
- Collection
- Ganglion
- Nodule thyroïdien
- Nodule mammaire
29
Quel est l'objectif d'un examen cytopathologique?
Dépistage et Orientation
| *le contrôle histologique est presque toujours nécessaire pour compléter les informations.
30
Définition de l'anatomie pathologique ?
- Etude des altérations morphologiques (macroscopique et microscopique) causées par la maladie à un tissus ou un organe.
- Spécialité basée sur une analyse sémiologique d'altérations morphologiques.
31
Dans quel contexte utilise-t-on la centrifugation ?
Lorsque le liquide recueilli est trop volumineux pour pouvoir être étalé ainsi sur une lame.
32
Expliquez le processus de centrifugation.
Une partie du liquide récolté est placé dans des tubes (avec ou sans fixateur alcoolique) qui seront centrifugés.
Le produit du culot sera placé sur une lame (CULOT-SPOT) la lame sera ensuite colorée et analysée.
33
Quels sont les avantages de la cytologie en monocouches ?
Le matériel résiduel se trouvant dans le fixateur alcoolique peut être employé pour faire des techniques complémentaires, comme la recherche de séquences virales d'HPV aidant à la classification des lésions cytologiques.
34
Quelles sont les différentes étapes pour obtenir une coupe colorée à l'hématoxyline - éosine ?
1) l'encodage.
2) l'examen macroscopique et la fixation.
3) la déshydratation et la mise en paraffine.
4) la coupe et la coloration à l'hématoxyline-éosine (réhydratation).
35
Quel est le fixateur le plus utilisé ?
le FORMOL à 10% tamponné (aux phosphates ou au carbonate de Calcium) à pH neutre ou légèrement alcalin.
36
Quelle est la vitesse maximale de fixation du formol ?
1mm d'épaisseur par heure.
37
Quel est le but de la fixation ?
IMMOBILISER les constituants cellulaires et tissulaires dans un état aussi voisin que possible de l’état vivant.
38
Quels sont les étapes de l’examen anatomo-pathologique standard ?
- Fixation (lors de la réalisation du prélèvement).
- Acheminement du prélèvement dans le service d’anatomie pathologique.
- Enregistrement du prélèvement.
- Examen macroscopique (description, réalisation des prélèvements).
- Inclusion du prélèvement dans un bloc de paraffine.
- Coupe du bloc inclus en paraffine au microtome.
- Coloration (Hématoxyline-éosine-safran HES).
- Examen au microscope.
- Rédaction du compte-rendu envoyé au clinicien ?
- Archivage des lames, des blocs d’inclusion et du double du compte-rendu.
39
De quoi dépend la qualité de la fixation ?
- Vitesse de diffusion du fixateur dans les tissus
* plonger rapidement tissus dans fixateur après exérèse
* Acessibilité des tissus (ouvertures des pièces opératoires)
- Vitesse des réactions chimiques (lentes)
40
Quelle est la durée de fixation d'une biopsie ?
6 à 12h pour une biopsie
41
Quelle est la durée de fixation des pièces opératoires ?
24h à 48h pour les pièces opératoires
42
Quels sont les avantages du FORMOL ?
- Fixation assez rapide
- Rigidifie les pièces => facilite coupe et prélèvements macroscopiques
- Analyses morphologiques et IHC très correctes
- Analyses moléculaires possibles
- Biocide (détruit tous les agents infectieux sauf le prions)
- Stockage, conservation faciles
- Peu couteux
43
Quels sont les inconvénients du FORMOL ?
- Toxique: irritant cutané, respiratoire
- Carcinogène de classe I
- Pas préservation optimale des acides nucléiques (notamment ARN, gênant vu le développement des techniques de biologie moléculaire
44
Quelles informations doivent être portées sur la feuille de demande ?
- Identité du patient
- Identité du prescripteur
- Date et nature du prélèvement
- Renseignements cliniques
- Antécédents du malade
*dessin si pièce complexe
45
En quoi consiste l'examen macroscopique ?
- Après fixation de 6-12h (biopsies) à 24-48h (pièce opératoire).
- Mesure de la pièce opératoire.
- Poids de la pièce opératoire.
- Description macroscopique des lésions
- Réalisation de prélèvement dans les zones macroscopiques anormales et saines.
- Chaque prélèvement est placé dans une cassette numérotée.
*Stockage des prélèvements résiduels après macroscopie
46
Quel est le but de l'inclusion en paraffine ?
Enrober prélèvement réalisé en macroscopie (fragment tissulaire) dans un support solide (paraffine) permettant de le couper au microtome
- L’inclusion a pour but de:
* déshydrater les tissus
* des les imprégner dans un solvant
* avant de les enrober en paraffine
47
Quelle est la procédure de stockage des prélèvements ?
- Prélèvements tissulaires dans les blocs de paraffine et des lames sur lesquelles le diagnostic a été porté :
* dans les archives du service d’anatomie pathologique.
* pendant au moins 10 ans (sauf pathologie pédiatrique, conservation à vie).
=> possibilité de "contre-expertise"
=> analyses complémentaires IHC, génétiques à partir des prélèvements inclus en paraffine
48
Quel est le délai de réponse d'une biopsie ?
En 24h au mieux pour les biopsies.
49
Quel est le délai de réponse d'une pièce opératoire ?
En 48h pour les pièces opératoires (fixation 24h).
50
Décrire la technique de l'examen cytologique
- Cytocentrifugation liquides (ascite, pleural)
- Etalement produit de cytoponction (pancréas, thyroide), brossage (voies biliaire), frottis...
- Apposition ou empreintes tissulaires (ganglions)
51
Quelle précaution faut-il prendre lors de l'examen cytologique ?
Examen cytologique doit être réalisé rapidement après le prélèvement (altération des cellules)
*si impossibilité, stockage du liquide à 4°C
52
Quel est le but de l'eaxamen cytologique ?
Recherche de cellules atypiques, appartenant à une prolifération tumorale maligne
53
Qu'est-ce un examen extemporané ?
Diagnostic anatomo-pathologique rapide
* en cours d'intervention chirurgicale
* dans le but de modifier le geste chirurgical
54
Quelles sont les indications de l'examen extemporané ?
Diagnostic est susceptible d'apporter une modification au déroulement chirurgical.
- Déterminer la nature bénigne ou maligne d'une lésion inflammatoire ou tumorale
- Caractère complet de la résection d'un cancer = s'assurer que les limites de résections sont saines.
- S'assurer qu'une biopsie chirurgicale a bien intéressée un territoire lésionnel = s'assurer que la lésion enlevée est bien représentative de la maladie.
55
Décrire la technique de l'examen extemporané
- Fixation rapide par congélation des tissus à -30°C
- Coupe tissulaire au cryostat
- Etalement sur lame
- Coloration rapide au bleu de toluidine ou HPS rapide
- Lecture au microscope
- Communication résultat rapide
*Pas de fixation formol, ni inclusion en paraffine
56
Quels sont les limites de l'examen extemporané ?
- La congélation ALTERE la morphologie, ce qui le rend moins fiable qu'un examen classique.
- ne donne qu'un reflet partiel de la lésion étant donné que l'examen se passe sur un maigre échantillon de la possible grande lésion.
- Examen rapide --> rique d'erreurs --> diagnostic de présemption
57
Qu'est-ce qu'un examen immunohistochimique ?
Mise en évidence d'Ag sur les péraparations histologiques à l'aide d'Ac spécifiques
58
Quelles sont les indications de l'IHC ?
DIAGNOSTIC: mise en évidence de certaines protéines spécifiques à certaines tumeurs ou virus peuvent être faite.
- Typage des tumeurs
* malignes peu différenciée primitives ou métastatique
* lymphomes
* sarcomes
- Orientation sur origine primitive d'un carcinome
- Détection de micrométastases
- Détection d'agents infectieux
THERAPEUTIQUE: certaines protéines sont considérées comme des cibles thérapeutiques.
- Recherche de marqueurs pronostiques et thérapeutiques
PRONOSTIC: mise en évidence de Ki-67 est caractéristiques des cellules cyclantes. plus le degré de prolifération est élevé, moins bon est le pronostic.
ATTENTION:
* pas de marqueurs IHC permettant de déterminer si tumeur maligne ou bénigne
* pas de marqueus IHC permettant de déterminer si cellule cancéreuse ou non
59
Citer certains agents infectieux pouvant être détectés par IHC
- CMV
- EBV (HIS)
- Herpès
- Helicobacter pylori
- BK
- Autres (labos spécilisés)
60
Quelles sont les indications de l'immunofluorescence directe ?
- Biopsies cutanées: maladies bulleuses, vascularite et lupus
- Biopsies rénales: typage glomérulopathies
UNIQUEMENT sur prélèvements tissulaires non fixés au formol)
61
Quelles sont les différents types d'autopsies ?
- Autopsie scienifique:
* à la demande d'un médecin
* en cas de mort naturelle
- Autopsie médico-légale:
* à la demade d'un magistrat
* en cas d'une mort "suspecte"
- Dissection anatomique
* enseignement de l'anatomie (étudiant en médecine, recherche...)
62
Quelles sont les limites de l'anatomie pathologique ?
- Evolution tumorale et pronostic dépendant de facteurs autres que morphologiques.
- Emergence de facteurs pronostiques moléculaires (mutations, délétions).
63
Décrire les principe de l'hybridation in situ
Repose sur propriétés de réassociation spécifique des acides nucléiques
* Dénaturation de l'ADN cellulaire par chauffage
* Apport d'une sonde dénaturée pouvant s'hybrider spécifiquement avec sa séquence cible
* élimination des hybrides non spécifiques et fragments de sondes non hybridées
* révélation des hybrides spécifiques par immunofluorescence, oxydoréduction ou immunopéroxydase indirecte
64
Quelle est la remarque à retenir concernant le xylène ?
Il dissout également les graisses
| ainsi les adipocytes sont optiquement vide par défaut.
65
Quelles sont les tissus qu'on ne peut techniquer et couper en extemporané ?
Les tissus calcifiés
66
Quel intéret des techniques de biologie moléculaire ?
- Mise en évidence des mutations spécifiques qui peuvent être des cibles thérapeutiques, ou de rechercher les clonalités d'un lymphomes.
67
Qui est l'un des fondateurs de l'anatomie pathologique moderne?
Rudolf Ludwig Karl Virchow
68
Quels sont les modes de fixation ?
- Fixation chimique: formol tamponé à 10%
| - Fixation physique: congélation (examen extemporané)
ANATOMOPATHOLOGIE
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