PCR

Question 1

Varför är Mg²⁺ en viktig komponent vid PCR?

Answer 1

• Katalyserar bindningen mellan 3’-OH och inkommande dNTP (fosfodiesterbindningen).
• Stabiliserar de negativa laddningarna mellan DNA och dNTPs.

Question 2

Vad är syftet med PCR?

Answer 2

Att amplifiera (kopiera) en specifik DNA-sekvens i många kopior.

Question 3

Vilka är de tre huvudstegen i en PCR-cykel?

Answer 3

Denaturering, annealing (primerinbindning), elongering.

Question 4

Vad sker under annealing-steget i PCR?

Answer 4

Primers binder in till komplementära sekvenser på DNA-mallen.

Question 5

Vad sker under denatureringssteget i PCR?

Answer 5

Dubbelsträngat DNA separeras till enkelsträngar genom upphettning.

Question 6

Vad sker under elongeringssteget i PCR?

Answer 6

DNA-polymeras syntetiserar nytt DNA från primern i 5’→3’-riktning.

Question 7

Varför krävs ett värmestabilt DNA-polymeras i PCR?

Answer 7

För att enzymet inte ska denatureras vid de höga temperaturerna.

Question 7

Vilka komponenter måste finnas i en PCR-reaktion?

Answer 7

DNA-mall, primers, värmestabilt DNA-polymeras, dNTP, buffert (Mg²⁺).

Question 8

Vad avgör specificiteten i PCR-reaktionen?

Answer 8

Primrarnas sekvens och deras bindning till mål-DNA.

Question 9

Hur skiljer sig PCR från DNA-replikation i cellen?

Answer 9

PCR sker in vitro och kräver primers; cellreplikation sker in vivo och kräver inte syntetiska primers.

Question 10

Vad avgör specificiteten i PCR-reaktionen?

Answer 10

Primrarnas sekvens och deras bindning till mål-DNA.

Question 11

Vad menas med att PCR är en exponentiell process?

Answer 11

Antalet DNA-kopior fördubblas vid varje cykel.

Question 12

Vad menas med processivitet i DNA-polymeras?

Answer 12

“Processivitet” refererar till förmågan hos en DNA-polymeras att hålla sig bunden till DNA-mallen under en längre tid och syntetisera flera nukleotider i en följd utan att lossna.

Detta innebär att en processiv DNA-polymeras kan syntetisera en lång DNA-sträng utan att
behöva släppa taget om mallen.