Barrera física del sistema inmune
Piel y mucosas
Divisiones del sistema inmune
Innato y Adaptativo
Sistema inmune innato
Rápida e innespecífica
Sistema Inmune ADAPTATIVO
Lenta y especifica
mecanismos de la inmunidad innata
proporcionan la defensa inicial contra las infecciones. Algunos mecanismos (p. ej., las barreras epiteliales) evitan las infecciones, y otros (p. ej., los fagocitos, los linfocitos citolíticos naturales [NK] y otras células linfociticas innatas [ILC], el sistema del complemento) eliminan los microbios.
Mecanismo de respuesta del sis. Inmune adaptativa
se desarrollan más tarde y están mediadas por los linfocitos y sus productos.
Los anticuerpos bloquean las infecciones y eliminan los microbios, y los linfocitos T erradican los microbios intracelulares.
Respuesta de Linfocitos B
- Reconocimiento del antígeno con su Ig de membrana
El linfocito B siempre empieza con IgM.
- Activación de linfocitos B -> permite cambio del tipo de anticuerpo que fabrica.
- Proliferación
- Diferenciación
Resultado:
1. Células plasmáticas secretoras de anticuerpos = secreción de anticuerpos
2. Linfocito B que expresa IgG = Cambio de isotipo ( tipo de anticuerpo).
3. Linfocito B que expresa Ig de alta afinidad = Maduración de la afinidad y Linfocitos B de memoria
ESTRUCTURA DEL ANTICUERPO
Composición básica:
2 cadenas pesadas (Heavy chains - H)
2 cadenas ligeras (Light chains - L)
Unidas por puentes disulfuro (S-S)
Cadena pesada (H):
VH: Región variable (Variable Heavy) → Une al antígeno
CH1, CH2, CH3 (y CH4 en algunos): Regiones constantes (Constant Heavy)
Cadena ligera (L):
VL: Región variable (Variable Light) → Une al antígeno
CL: Región constante (Constant Light)
Las pruebas de laboratorio asisten al patologo para:
• Laidentificacióndepatógenos
• Medición de los componentes de la sangre
• Examinar los detalles microscópicos o la arquitectura de un tejido.
Para que sirven los anticuerpos?
Identificar, cuantificar, localizar moléculas y células
Elisa
• Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay
-> Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas
• Es una prueba de laboratorio que se basa en las Interacciones Antígeno-anticuerpo para detectar o cuantificar una sustancia.
• Los anticuerpos utilizados son de origen monoclonal (Reconoce UNA sola parte del antígeno)
Conventional Elisa Assay
ELISA DIRECTO
• El antígeno se inmoviliza sobre una placa
• Se añade un anticuerpo primario marcado con una enzima que se unirá al antígeno interés.
• Se añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionara una señal visible
• Permite la detección y/o cuantificación del antígeno de interés
• Analizar la respuesta inmune frente a un determinado antígeno
• Menor sensibilidad
• Mayor ruido de fondo ya que las proteínas de las muestras y los antigenos se quedan en el fondo
ELISA INDIRECTO
• El antígeno se inmoviliza sobre una placa
• Se añade un Ac primario sin marcar que se une al antígeno de interés
(Sin marcar” = no tiene enzima -> El anticuerpo solo se pega, pero no produce color)
• Se añade un Ac secundario marcado con una enzima que se unirá al anticuerpo primario
• Se añade el sustrato que al reaccionar con la enzima proporcionara una luz visible
• Detecta y/o cuantifica el antígeno de interés
• Determinar concentración total del anticuerpo en una muestra
• Alta sensibilidad
• El procedimiento es muy largo
• Posible reacción cruzada
Elisa tipo sándwich
• El Ac de captura se inmoviliza -> Se fija a la placa
• Se añade la muestra que contiene el antígeno de interés que se unirá al anticuerpo
• Se añade el Ac de detección que se unirá al Ag unido a su vez al Ac de captura
• Se añade un Ac secundario marcado que se unirá al anticuerpo de detección.
• Se añade el sustrato y se proporcionará una señal visible
• Detección y/o cuantificación del Ag
Cuando se usa Elisa tipo sándwich
• Análisis de muestras complejas
• Alta sensibilidad y Especificidad
Citometría de Flujo
Método rápido objetivo y cuantitativo de análisis de células, núcleos, cromosomas, mitocondrias u otras partículas en suspensión.
Técnica de análisis que permite identificar a diferentes poblaciones celulares simultanemente.
- Las células se suspenden en líquido
- Pasan una por una frente al láser
- El láserpega en la célula :
> Rebota (FSC)
> Se dispersa (SSC)
< Excita los fluorocromos → emiten luz de color. - Los detectores captan la señal
- La computadora analiza y cuantifica convirtiendo luz en números y gráficas
Parámetros medibles por cito metros de flujo
Parámetros nucleares
Parámetros de superficie
Parámetros extracelulares
Parámetros citoplasmáticos
Clúster de Diferenciación
Cluster de diferenciación
• Proteínas que se encuentran en la superficie celular.
• Cada molécula CD pueden ser especificas para una célula o para un linaje celular.
• Más de 400 marcadores celulares
CD
Citometría de flujo Markers
Clúster de Diferenciación
Como se utiliza Citometría de Flujo
Es necesario que las células se encuentran en un medio líquido (buffer de fosfatos); con lo que las células son alineadas en fila india.
• Un sistema óptico (láseres y filtros) iluminan las células.
• Se puede conocer el tamaño y la granularidad.
• Se pueden conocer las proteínas que expresan (marcadores)
• La señal luminosa se traduce en señales electrónicas.
Que determinan la dispersiones de la Luz en la citometria de flujo
La desviación frontal de la Luz determina el tamaño celular mientras que la dispersión lateral determina complejidad
Ejemplos de usos de citometria de flujo
• Diagnóstico de leucemias, linfomas
• Seguimiento de enfermedades : VIH
• Estudio de cáncer
• Cuantificación de concentraciones de moléculas solubles
• Eficacia de tratamientos antitumorales e inmunosupresores
Como se reconocen los antígenos de agentes patogenos
Por anticuerpos
